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文檔簡介
1、在發(fā)達國家,前列腺癌是臨床上排名第二的常見腫瘤,同時也是男性腫瘤死亡率排第三的疾病。我國前列腺癌的發(fā)病率雖明顯低于歐美國家,但近年隨著人均壽命的延長、膳食結構的改變和診斷技術的提高,發(fā)病率有明顯增高的趨勢,在男性泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中發(fā)病率躍居第三位。前列腺癌的發(fā)病機制未明,但是其局部微環(huán)境理應有重要作用,ADAM分子是近年新發(fā)現的具有重要作用的金屬蛋白酶分子,因此,本課題擬探討其中一種分子ADAM22在前列腺癌中的表達和意義。
2、 目的:探討ADAM22在前列腺癌中的分布和意義。制備其特異性抗體。判斷細胞因子對其調節(jié)及分子機理。其對腫瘤凋亡的影響,從而從新的角度探討前列腺癌的發(fā)病及病理情況,為前列腺癌的診治和預后建立新的評判角度。
方法:RT-PCR法克隆ADAM22cDNA,將其胞膜外區(qū)插入載體,誘導表達并純化,免疫小鼠制備單克隆抗體并利用流式細胞術、westernblot和免疫組織化學進行鑒定。探討TNF-α誘導前列腺癌細胞ADAM22轉錄,表達
3、及其相關信號轉導途徑。觀察重組ADAM22對重組Fas的水解作用以及抗體對這種作用的封閉,將ADAM22與Fas基因共轉染或進行基因干涉,判斷其對Fas誘導凋亡的影響。
結果:成功克隆ADAM22cDNA并表達融合蛋白。獲得3株ADAM22特異性單克隆抗體,其中一株能夠用于流式鑒定,一株能夠用于免疫組織化學鑒定。ADAM22在前列腺癌中陽性分布,主要集中在腺樣上皮和間質細胞中。TNF-α通過活化p38MAPK和NF-κB而促進
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