解整合素-金屬蛋白酶12作為子癇前期篩查標(biāo)志物的初步研究.pdf

1、研究背景 子癇前期是孕產(chǎn)婦和胎兒病率、死亡率的主要原因，由于病因未明，其早期診斷和預(yù)防仍是我們面臨的巨大挑戰(zhàn)。ADAM 12屬ADAM家族成員之一，目前已有的研究結(jié)果預(yù)示其極可能成為一種新的、重要的產(chǎn)前篩查標(biāo)志物。 研究目的 初步建立定量檢測人血清ADAM 12-S的間接競爭法ELISA，并利用這一方法初步評價孕中期血清ADAM 12可否作為子癇前期篩查的一種標(biāo)志物。 研究方法 采用多肽合成的方法

2、，選擇ADAM 12-S最具特異性的34個氨基酸的C-末端作為包被抗原和標(biāo)準(zhǔn)品，標(biāo)本中ADAM 12-S水平通過分子量比例換算來定量反映。多肽與載體偶聯(lián)后，免疫家兔，制備并純化抗ADAM 12-S多克隆抗體作為一抗。確定包被抗原濃度、一抗工作稀釋度，以此優(yōu)化條件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而初步建立檢測人血清ADAM 12-S的間接競爭法ELISA。利用這一方法，通過病例．對照研究檢測2002年至2006年間在北京協(xié)和醫(yī)院行產(chǎn)前檢查，并住院分娩的1

3、00例子癇前期患者與200例正常妊娠婦女的孕14～18周血清標(biāo)本中ADAM 12水平，將其轉(zhuǎn)換成MoM值后比較其有無明顯差異。 結(jié)果 確定包被抗原濃度為0.25ug/ml，抗ADAM 12-S多克隆抗體工作稀釋度為1：6,000，以此優(yōu)化條件初步建立檢測人血清ADAM 12-S間接競爭法ELISA，最低檢測限0.137ug/L(多肽)，定量檢測區(qū)間0.137～100ug/L(多肽)，標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸系數(shù)R<'2>=0.984

4、。以此方法檢測得到正常孕婦孕14～18周血清ADAM 12中位數(shù)分別為680ug/L、738ug/L、801ug/L、849ug/L和900ug/L，子癇前期患者孕14～18周血清ADAM 12中位數(shù)分別為598ug/L、664ug/L、7291ug/L、791ug/L和839ug/L。正常孕婦和子癇前期患者這一時期血清ADAM 12水平逐漸上升，且上升的趨勢相近。子癇前期組患者血清ADAM 12 LogMoM平均值-0.05242，明

5、顯低于正常孕婦組血清ADAM 12 LogMoM平均值-0.00368(P<0.001)。 結(jié)論 本研究初步建立了定量檢測人血清ADAM 12-S的間接競爭法ELISA；得到了正常孕婦和子癇前期患者孕14～18周血清ADAM 12中位數(shù)，正常孕婦和子癇前期患者這一時期血清ADAM 12水平逐漸上升，且上升的趨勢相近；子癇前期組患者孕14～18周血清ADAM 12水平明顯低于正常孕婦，孕中期血清ADAM12可能作為子癇前期