肺炎克雷伯菌醫(yī)院血流感染暴發(fā)的分子流行病學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　醫(yī)院感染暴發(fā)即在醫(yī)療機(jī)構(gòu)或其科室中，短時(shí)間內(nèi)發(fā)生3例以上同種同源醫(yī)院感染事件的現(xiàn)象。醫(yī)院感染暴發(fā)，病死率高，易引起公眾的普遍關(guān)注。為了有效地控制感染的流行，必須迅速查明感染源，目前公認(rèn)的查找感染源的方法是分離病原菌并對(duì)其同源性進(jìn)行分析。本研究選取一起近期醫(yī)院血流感染暴發(fā)事件分離的肺炎克雷伯菌株，應(yīng)用抗生素藥敏試驗(yàn)，脈沖場(chǎng)凝膠電泳和多位點(diǎn)序列分析的方法對(duì)病原體進(jìn)行同源性分型，為及時(shí)有效的控制感染的流行提供依據(jù)。
　

2、　方法：
　　1、菌株來(lái)源和藥敏試驗(yàn)：試驗(yàn)菌株分離自天津市某醫(yī)院外科病房2010年7月16日至7月28日5名醫(yī)院血流感染患者的8株肺炎克雷伯菌臨床株(Kp1-Kp8)；對(duì)照菌株分離自同期天津市另一家醫(yī)院感染科病房的6株肺炎克雷伯菌臨床株(Kp9-Kp13)。采用瓊脂紙片擴(kuò)散法(K-B法)和微量肉湯稀釋法(MICs)檢測(cè)肺炎克雷伯菌臨床株對(duì)11種常用抗菌藥物(氨芐西林、頭孢唑林、慶大霉素、頭孢哌酮、環(huán)丙沙星、頭孢曲松、阿莫西林/克拉

3、維酸、美羅培能、哌拉西林、復(fù)方磺胺甲惡唑、氨曲南)的耐藥性。
　　2、脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)：提取肺炎克雷伯菌全基因組DNA，經(jīng)限制性內(nèi)切酶Xbal酶解后進(jìn)行肺炎克雷伯菌全基因組DNA的脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)分析。
　　3、多位點(diǎn)序列分析(MLST)：從試驗(yàn)株中選取菌株Kp1及另2株Kp4，Kp5；從對(duì)照株中選取2株Kp9和K13，共5株肺炎克雷伯菌臨床株，分別擴(kuò)增其7個(gè)管家基因(rpoB，gapA，mdh，pgi，

4、phoE，infB，tonB)的核心片段(318bp-501bp)，并進(jìn)行序列分析，將測(cè)序結(jié)果提交國(guó)際數(shù)據(jù)庫(kù)網(wǎng)站http：//www.mlst.net，獲得菌株的ST型。
　　結(jié)果：
　　1、藥敏試驗(yàn)：8株試驗(yàn)菌株對(duì)11種抗菌藥物的藥敏結(jié)果顯示：菌株Kp1對(duì)氨芐西林、頭孢唑林、慶大霉素、阿莫西林/克拉維酸耐藥，對(duì)美羅培能、哌拉西林、復(fù)方磺胺甲惡唑、氨曲南、頭孢哌酮、環(huán)丙沙星、頭孢曲松敏感；菌株Kp2等其他7株肺炎克雷伯菌臨床

5、株的抗生素藥敏譜完全相同，且均為多重耐藥菌，即對(duì)氨芐西林、頭孢唑林、慶大霉素、頭孢哌酮、環(huán)丙沙星、頭孢曲松耐藥，對(duì)阿莫西林/克拉維酸、美羅培能、哌拉西林、復(fù)方磺胺甲惡唑、氨曲南敏感。6株對(duì)照菌株中：菌株 Kp14對(duì)11種抗菌藥物均敏感；菌株Kp9和Kp12對(duì)哌拉西林、氨芐西林、頭孢唑林、慶大霉素、頭孢哌酮、環(huán)丙沙星、頭孢曲松、阿莫西林/克拉維酸耐藥，對(duì)美羅培能、復(fù)方磺胺甲惡唑、氨曲南敏感；其它3株菌的藥敏譜不盡相同。
　　2、PF

6、GE結(jié)果：8株試驗(yàn)菌株中，共分出2型，菌株Kp2-Kp8共7株肺炎克雷伯菌臨床株的PFGE譜型一致，即均具有11條電泳條帶，且相應(yīng)條帶大小相同，為PFGEⅡ型；菌株Kp1具有12條電泳條帶，與Kp2等其它7株有7條條帶以上的差異，為PFGEⅠ型。6株對(duì)照菌株共分出6型，其電泳條帶數(shù)9-12條不等，均具有7條以上條帶的差異。
　　3、MLST的結(jié)果：3株試驗(yàn)菌株中，菌株Kp4，Kp5具有一致的MLST型，即ST133(12，1，1，

7、2，5，1，36)，與菌株Kp1(10，1，1，1，9，4，12)有5個(gè)基因座不同，為不相關(guān)菌株。2株對(duì)照菌株中，菌株Kp13的ST型為ST86(9，4，2，1，1，1，27)，與菌株Kp9(1，1，1，1，1，1，36)具有6個(gè)基因座的不同，為不相關(guān)菌株。這一研究結(jié)果與PFGE的研究結(jié)果一致。菌株Kp1與菌株Kp9均在MLST數(shù)據(jù)庫(kù)中未查詢到相應(yīng)的ST型。菌株Kp1的ST型與ST23，ST548，ST793，ST808最為接近，菌株K

8、p9的ST型與ST15，ST132，ST326，ST655，ST709，ST748最為接近。
　　結(jié)論：
　　1、經(jīng)抗生素藥敏試驗(yàn)、脈沖場(chǎng)凝膠電泳和多位點(diǎn)序列分析的分型研究，可以判定天津市某醫(yī)院外科病房2010年7月16日至7月28日手術(shù)后發(fā)生的5例血流感染患者為肺炎克雷伯菌醫(yī)院血流感染暴發(fā)。分離自患者A的痰和血液中的肺炎克雷伯菌(Kp2，Kp3，Kp6)與分離自患者B(Kp4)，C(KpS)，D(Kp7)，E(Kp8)4名

9、患者血液中的肺炎克雷伯菌為同一克隆株，根據(jù)5名患者感染的先后順序，可能患者A為此次醫(yī)院感染暴發(fā)的感染源，通過(guò)交互感染傳給B，C，D，E四名患者。分離自患者A腹腔引流液的菌株Kp1與分離自其痰(Kp2)和血液中(Kp3，Kp6)的肺炎克雷伯菌不具有同源性。菌株Kp6可能是患者A的感染未治愈或?yàn)橹斡蟮亩胃腥尽?br>　　2、抗生素藥敏譜分型對(duì)初步判斷醫(yī)院血流感染暴發(fā)有一定價(jià)值，尤其適合于基層醫(yī)院，但精確性欠缺。
　　3、脈沖場(chǎng)凝膠