2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩96頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、目的:利用基因芯片技術(shù)檢測細(xì)胞周期相關(guān)基因在青蒿素及其衍生物(二氫青蒿素和青蒿琥酯)作用于K562細(xì)胞后的表達(dá)情況,旨在從基因水平上探討青蒿素及其衍生物抑制K562細(xì)胞增殖的機理,尤其是青蒿素及其衍生物抑制K562細(xì)胞周期作用的分子機制。 方法:查找相關(guān)文獻(xiàn),確定與本研究密切相關(guān)的細(xì)胞周期基因,在Gene Bank中查找這些基因的mRNA序列,據(jù)此序列用01ig06.0設(shè)計寡核苷酸探針,合成好的探針用SpotArray ASP7

2、201基因芯片點樣儀點制芯片。取對數(shù)生成期的K562細(xì)胞,經(jīng)青蒿素、二氫青蒿素和青蒿琥酯(濃度均為1×10<'-6>mol/L、4×10<'-6>mol/L、16×10<'-6>mol/L、64×10<'-6>mol/L和256×10<'-6>mol/LL)處理24小時,倒置光顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,用Hoechst33342/PI雙熒光染色后,熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞核變化,再用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期的變化。TRIzol試劑提取總RNA

3、,并進(jìn)行質(zhì)控。將總RNA逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA,同時用Cy3進(jìn)行標(biāo)記。標(biāo)記好的cDNA與細(xì)胞周期相關(guān)基因芯片雜交,用Gene Pix 4100A掃描儀檢測雜交結(jié)果,分析基因表達(dá)情況。 結(jié)果:選擇相關(guān)基因34條,每條基因設(shè)計兩條寡核苷酸探針。探針長度約40bp,GC含量40%-60%,自身無二級結(jié)構(gòu),并與其它基因同源性小于70%。合成的寡核苷酸探針,用SpotArray ASP7201基因芯片點樣儀把探針點在片基上,完成細(xì)胞周期相關(guān)

4、基因芯片構(gòu)建。K562細(xì)胞經(jīng)青蒿素、二氫青蒿素和青蒿琥酯處理24小時后,倒置光顯微鏡下可見:細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的皺縮,核分裂相減少,細(xì)胞密度下降,漂浮細(xì)胞增多,細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象,細(xì)胞內(nèi)可見多個折光性較強的圓形小泡樣結(jié)構(gòu)和細(xì)胞出芽樣改變。其中,濃度為256×10<'-6>mol/L的青蒿素與64×10<'-6>mol/L、256×10<'-6>mol/L二氫青蒿素和青蒿琥酯處理的細(xì)胞形態(tài)變化較明顯。用Hoechst33342/PI雙

5、熒光染色后,熒光顯微鏡下可觀察到染色質(zhì)高度濃縮、邊緣化,凝聚成明亮的團(tuán)塊,即凋亡小體。流式細(xì)胞儀檢測顯示:處在G<,2>期細(xì)胞的比例明顯增加,被處理的腫瘤細(xì)胞多被阻抑在G2期。TRIzol試劑提取總RNA,總含量均達(dá)到實驗要求,純度較高,基本上沒有蛋白質(zhì)和DNA的污染。電泳分析總RNA的完整性,電泳圖上可見清楚的28S和18S條帶,且28S:18S大約為2:1,表明提取的總RNA質(zhì)量較好,沒有發(fā)生降解??俁NA逆轉(zhuǎn)錄生成的cDNA與基因

6、芯片在42℃,雜交16小時后,用GenePiX 4100A掃描儀分析雜交結(jié)果。其中17條基因表達(dá)有差異。青蒿素組與正常對照相比表達(dá)下調(diào)的基因有:CyclinDl、Cdl(4、Cdk2、Cdc2、DNA-PK、DNA-TopoI、MCL-1、ERK-3、JNK、VEGF,共計10個;二氫青蒿素組與正常對照相比表達(dá)上調(diào)的基因有:Chk1,表達(dá)下調(diào)的基因有:PCNA、CyclinBl、CyclihDl、CyclinEl、Cdk4、Cdk2、E

7、2F1、DNA-PK、DNA-T0poI、MCL-1、JNK、VEGF,共計13個;青蒿琥酯組與正常對照相比表達(dá)上調(diào)的基因有:p21、Chkl,表達(dá)下調(diào)的基因有:CyclinBl、CyclinEl、E2F1、DNA-PK、hTERT、Bcl-2、VEGF、JNK,共計10個。 結(jié)論:青蒿素及其衍生物(二氫青蒿素和青蒿琥酯)可以抑制K562細(xì)胞增殖。作用機制主要是通過改變細(xì)胞周期某些調(diào)控物質(zhì)的基因表達(dá)來阻抑K562的細(xì)胞周期運行;

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論