降脂類中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制方法與研究.pdf

1、近年來,臨床藥理研究證明,許多中藥材如決明子、大黃、何首烏、澤瀉、銀杏葉等都具有降低血脂的功能。利用這些中藥材所制成的復(fù)方制劑在臨床上也得到了廣泛的應(yīng)用。降脂類中藥復(fù)方制劑是基于天然中藥材及中醫(yī)理論研究開發(fā)出的藥品,它不僅能明顯降低血清中膽固醇、甘油三酯的含量,還能大大降低冠心病和腦血管病的發(fā)生率及死亡率,提高機體抗氧化等能力。在臨床上,治療心腦血管疾病的西藥一般采用他汀類、煙酸類、苯氧酸類、多烯脂肪酸類等治療,雖然療效確切,但經(jīng)常會引

2、起頭痛、眩暈、惡心、腹瀉、腹脹、皮疹等不良反應(yīng)。與西藥相比中藥制劑的降脂作用雖然緩慢,但安全系數(shù)高,功效全面、療效確切,無明顯的毒副作用。研究還證實,降脂類中藥制劑除有降脂作用外,還能減緩或終止動脈粥樣硬化的過程,經(jīng)長期服用可取得良好的治療效果。
　　 為了使降脂中藥復(fù)方制劑得到安全、廣泛的應(yīng)用,對其指標(biāo)成分的質(zhì)量控制就成為我們研究的主要對象。藥品質(zhì)量的可控性是藥品的基本屬性,是藥品的安全性和有效性的基礎(chǔ)。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是控制藥品質(zhì)量

3、的重要手段,能有效的控制藥品的質(zhì)量,確保用藥的安全,是質(zhì)量可控性的具體體現(xiàn)。本課題選用降脂寧顆粒、脂降寧片、消渴靈片中的指標(biāo)成分作為研究對象,采用反相高效液相色譜法和高效毛細管電泳法對復(fù)方制劑中指標(biāo)成分的質(zhì)量控制進行較為系統(tǒng)的方法學(xué)研究。所建立的方法專屬性強、精密度和穩(wěn)定性良好,實驗結(jié)果準(zhǔn)確可靠,可為降脂中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制提供科學(xué)、有效的試驗方法與依據(jù)。
　　 第一部分：反相高效液相色譜法測定降脂寧顆粒中二苯乙烯苷、橙黃決明

4、素、大黃素和大黃素甲醚的含量
　　 目的:建立反相高效液相色譜法同時測定降脂寧顆粒中二苯乙烯苷、橙黃決明素、大黃素和大黃素甲醚的含量測定方法,為降脂寧顆粒的質(zhì)量控制提供依據(jù)。
　　 方法:
　　 1：提取方法:選用不同提取溶劑和不同提取時間來提高降脂寧顆粒指標(biāo)成分的提取效率的方法。
　　 2：反相高效液相色潛法的優(yōu)化條件:選擇合適的流動相緩沖系統(tǒng),調(diào)整流動相的組成、配比、流速以及柱溫,在最大吸收波長下測定

5、,使指標(biāo)峰與其它峰得到完全分離。
　　 3：系統(tǒng)適應(yīng)性試驗:在確定的提取方法和色譜條件下,考察4種被測組分的分離度、理論塔板數(shù)、對稱因子等是否符合要求。
　　 4：方法學(xué)的考察:標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制、最低檢測限試驗、精密度試驗、重復(fù)性試驗、穩(wěn)定性試驗、回收率試驗。
　　 5：樣品含量測定:取4批降脂寧顆粒樣品制備成供試品溶液,測定各批樣品中四種指標(biāo)成分的含量。
　　 結(jié)果:
　　 1：提取方法:以75％

6、甲醇為提取溶劑,30 min為最佳超聲時間來制備供試品溶液,使各組分的提取率達到最大。
　　 2：反相高效液相色潛法的條件:采用DiamonsilTM C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色譜柱;0.1％磷酸溶液(A)-甲醇(D)作為流動相;洗脫條件:0～5 min75％A,5～15 min60％A,15～25 min50％A.,25～30 min20％A,30～40 min10％A;流速為1.0 mL/min;檢測波長

7、是286 nm;柱溫25℃;進樣量20μL。
　　 3：系統(tǒng)適應(yīng)性試驗:二苯乙烯苷、橙黃決明素、大黃素和大黃素甲醚峰形良好,無其它峰干擾,其理論塔板數(shù)均大于5000,與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。
　　 4：方法學(xué)的考察:二苯乙烯苷、橙黃決明素、大黃素和大黃素甲醚分別在0.580～4.06μg、0.219～1.32μg、0.0540～43.324μg、0.186～1.12μg,范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系,回歸方程分別為:

8、A=2.06×103c-5.60(r=0.9998)、A=1.36x103c-5.49(r=0.9998)、A=7.24×102c-2.27(r=0.9995)、A=8.53×103c-20.5(r=0.9997);該方法精密度試驗的RSD值分別為0.94％、1.8％、1.7％、1.9％;重復(fù)性試驗的RSD值分別為1.3％、1.2％、0.76％、2.0％;12小時內(nèi)穩(wěn)定性的RSD分別為1.9％、2.7％、1.4％、2.6％;平均回收率分

9、別為96.2％、96.1％、96.6％、97.7％,RSD分別為0.74％、1.0％、3.1％、2.6％(n=5)。
　　 5：含量測定:在所建立的色譜條件下,對不同批次的降脂寧顆粒中四種指標(biāo)成分的含量進行同時測定,再用外標(biāo)法計算樣品各成分的含量。
　　 結(jié)論:該方法準(zhǔn)確、方便、靈敏度高、穩(wěn)定性好,可作為降脂寧顆粒中二苯乙烯苷、橙黃決明素、大黃素和大黃素甲醚的含量測定方法。該方法也為降脂寧顆粒的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

10、>　　 第二部分：脂降寧片中丹參素、綠原酸、葛根素、二苯乙烯苷和橙黃決明素的HPLC法測定
　　 目的:建立了HPLC法同時測定脂降寧片中的五種指標(biāo)成分-丹參素、綠原酸、葛根素、二苯乙烯苷和橙黃決明素。為該制劑的質(zhì)量控制提供參考。
　　 方法:
　　 1：提取方法:對供試品溶液進行回流提取和超聲提取,并對這兩種提取方法進行比較,選擇提取效率較高的方法。
　　 2：反相高效液相色潛法的優(yōu)化條件:選用合適的

11、色譜柱及檢測波長,調(diào)整流動相的組成、配比、以及流速和柱溫。
　　 3：系統(tǒng)適應(yīng)性試驗:在已確定的提取方法和色譜條件下,考察5種被測組分的分離度、理論塔板數(shù)、對稱因子等是否符合要求。
　　 4：方法學(xué)的考察:制作標(biāo)準(zhǔn)曲線、最低檢測限試驗、精密度試驗、重復(fù)性試驗、穩(wěn)定性試驗、回收率試驗。
　　 5：含量測定:取不同批次的脂降寧片,測定各批次中五種指標(biāo)成分的含量。
　　 結(jié)果:
　　 1:提取方法:以7

12、5％甲醇為提取溶劑,30 min為最佳超聲時間來制備供試品溶液,可使各組分的提取率達到最大。
　　 2:色潛條件的優(yōu)化:采用Kromasil C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色譜柱;以0.1％磷酸溶液-甲醇-乙腈為流動相,梯度洗脫,檢測波長是286 nm;柱溫25℃;進樣量為10μL。
　　 3:系統(tǒng)適應(yīng)性試驗:丹參素、綠原酸、葛根素、二苯乙烯苷和橙黃決明素峰形良好,無其它峰干擾,其理論塔板數(shù)均大于5000,

13、與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。
　　 4:方法學(xué)驗證:丹參素、綠原酸、葛根素、二苯乙烯苷和橙黃決明素分別在4.93～1.58×102μg/mL、1.39～4.44×102μg/mL、8.08～2.59×102μg/mL、4.53～1.45×102μg/mL和1.10～3.52×102μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,回歸方程分別為:A=7.01×102c-0.310(r=0.9998)、A=4.29x103c+0.0725(

14、r=0.9997)、A=3.11×103C+0.760(r=0.9998)、A=1.74×x103c-1.43(r=0.9997)、A=44.02x103c-1.11(r=0.9996);該方法精密度試驗的RSD值分別為0.41％、0.74％、0.66％、0.83％和1.3％;重復(fù)性試驗的RSD值分別為O.56％、0.71％、0.96％、1.2％和1.9％;12小時內(nèi)穩(wěn)定性的RSD分別為1.1％、1.8％、0.95％、1.6％和2.1％

15、;平均回收率分別為96.5％、98.2％、97.2％、95.9％和96.0％,RSD分別為0.94％、1.6％、0.68％、2.O％和0.72％(n=5)。
　　 5:含量測定:對不同批次的脂降寧片中五種指標(biāo)成分的含量進行測定之后,再用外標(biāo)法計算各樣品指標(biāo)成分的含量。
　　 結(jié)論:
　　 本文建立了反相高效液相色潛法測定脂降寧片中丹參素、綠原酸、葛根素、二苯乙烯苷和橙黃決明素的含量測定方法。該方法準(zhǔn)確、方便、靈敏

16、度高為脂降寧片的質(zhì)量控制提供了依據(jù),為保證中藥復(fù)方制劑的質(zhì)量提供良好的質(zhì)控方法。
　　 第三部分:膠束電動毛細管電泳法同時測定脂降寧片中葛根素、丹酚酸B和丹參素的含量
　　 目的:建立可以同時測定脂降寧片中葛根素、丹酚酸B和丹參素的含量的膠束電動毛細管電泳法。
　　 方法:
　　 1:提取條件:采用回流提取和超聲提取兩種方法,比較樣品中指標(biāo)成分的含量,選擇提取率較高的方法。
　　 2:電泳條件:采

17、用未涂層石英毛細管(50.2 cm×75μm×40 cm)為分離柱,80 mmoL/L磷酸二氫鈉-8 mmoL/L-十二烷基硫酸鈉(SDS)-10％乙腈(pH為6.30)為運行緩沖液,重力進樣5 s(0.5 Psi),在分離電壓20 kV、溫度22℃、紫外檢測波長為214 nm時,對脂降寧片中葛根素、丹酚酸B和丹參素進行分離測定,同時考察影響各組分分離效果的因素。
　　 3:系統(tǒng)適應(yīng)性試驗:在己確定的提取方法和電泳條件下,考察被

18、測組分的分離度和遷移時間等。
　　 4:方法學(xué)的考察:制作標(biāo)準(zhǔn)曲線、最低檢測限試驗、精密度試驗、穩(wěn)定性試驗、回收率試驗。
　　 5:含量測定:取三批次的脂降寧片制備成供試品溶液,測定其三種指標(biāo)成分的含量。
　　 結(jié)果:
　　 1：本試驗建立了膠束電動毛細管電泳法同時測定脂降寧片中葛根素、丹酚酸B和丹參素的方法。三種組分能在20 min內(nèi)全部實現(xiàn)基線分離。
　　 2：三組分分別在18.0～2.89x

19、102μg/mL、3.23～51.7μg/mL、19.7～3.14×102μg/mL濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系,線性方程分別為:A=6.18×105c+56.8(r=0.9999)、A=1.19×106c+49.0(r=1.000)、A=9.21×105c-75.2(r=0.9999);精密度試驗的RSD值為2.3％、1.4％、3.2％;穩(wěn)定性試驗的RSD為1.2％、2.6％、2.5％;樣品的平均回收率為97.5％、97.8％、

20、97.1％,RSD值分別為1.5％、2.2％、1.9％。
　　 結(jié)論:
　　 該方法簡單、快速、回收率高、試驗成本低,為脂降寧片的質(zhì)量控制提供了有力依據(jù),同時也為中藥復(fù)方制劑的毛細管電泳測定提供了參考。
　　 第四部分:反相高效液相色譜法測定消渴靈片中鹽酸小檗堿的含量
　　 目的:采用反相高效液相色譜法測定消渴靈片中鹽酸小檗堿的含量方法。
　　 1：提取方法:以75％甲醇為提取溶劑,25 min為

21、最佳超聲時間來制備供試品溶液,使鹽酸小檗堿的提取效率達到最高。
　　 2：色譜條件的優(yōu)化:采用DiamonsilTM C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色譜柱;以0.1％磷酸(A)-甲醇(B)為流動相,梯度洗脫條件為0～10 min90％A,10～25 min70％A,25～40 min40％A,40～45 min10％A:檢測波長是265 nm;柱溫25℃;進樣量為10μL。
　　 3：系統(tǒng)適應(yīng)性試驗:在已確

22、定的提取方法和色譜條件下,考察被測組分的分離度、理論塔板數(shù)、對稱因子等是否符合要求。
　　 4：方法學(xué)的考察:制作標(biāo)準(zhǔn)曲線、最低檢測限試驗、精密度試驗、重復(fù)性試驗、穩(wěn)定性試驗、回收率試驗。(5)含量測定:取三批次的消渴靈片制備供試品溶液,測定鹽酸小檗堿的含量。
　　 結(jié)果:
　　 1：系統(tǒng)適應(yīng)性試驗:鹽酸小檗堿的峰形良好,無其它干擾峰,其理論塔板數(shù)大于10000,與相鄰色譜峰的分離度大于1.5。
　　 2

23、：方法學(xué)的考察:鹽酸小檗堿在0.0268～0.429 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,回歸方程為:A=9.70×103c+3.14(r=0.9999);該方法精密度試驗的RSD值為0.76％;重復(fù)性試驗的RSD值為0.38％;24小時內(nèi)穩(wěn)定性的RSD為O.62％;平均回收率為98.2％,RSD為1.4％(n=5)。
　　 3：含量測定:三批次中鹽酸小檗堿的平均含量分別為4.78 mg/g、4.47mg/g、4.86 mg/g。