體液中血紅蛋白類制品的定性定量測定方法研究.pdf

1、本文探討以特異性抗原抗體結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的蛋白芯片技術(shù)，建立高選擇性、高靈敏度、高通量的定性/定量測定人體液中特定血紅蛋白類制品的新型檢測方法。 用Westren-blot方法和采用固定相—血紅蛋白—抗血紅蛋白抗體模式的抗原芯片方法測定抗豬血紅蛋白聚合體抗體與人或牛血紅蛋白聚合體、人血紅蛋白單體和人血漿交叉反應(yīng)特性，以了解相應(yīng)抗體作為體液中相應(yīng)動物源性血紅蛋白類氧載體測定方法的檢測抗體的質(zhì)量優(yōu)劣性；以戊二醛聚合豬血紅蛋白為例，研究

2、抗原芯片和抗體芯片方法定量測定血紅蛋白樣品的特性；采用抗原芯片和抗體芯片分別進(jìn)行人血漿、尿液對檢測方法的干擾研究，并建立在人體液中定性/定量測定血紅蛋白類制品的檢測方法；將所建立的蛋白質(zhì)芯片方法于戊二醛聚合豬血紅蛋白在大鼠體內(nèi)藥代的應(yīng)用進(jìn)行了可行性研究。 所測抗豬血紅蛋白抗體不識別人或牛血紅蛋白聚合體、人血紅蛋白單體和人血漿蛋白。本蛋白芯片方法測定戊二醛聚合豬血紅蛋白線性關(guān)系良好，線性范圍一般在1-12μg/mL，檢測限度為0.

3、0005g/L；同一實驗不同玻片平行測定結(jié)果有一定差異，合并不同玻片數(shù)據(jù)可明顯提高測定質(zhì)量，但是同樣樣品不同批實驗結(jié)果重復(fù)性差、無固定關(guān)系。利用抗原芯片進(jìn)行人體液中戊二醛聚合豬血紅蛋白線性效果好，線性范圍一般在50-600μg/mL，檢測限度為0.025g/L；抗體芯片方法線性關(guān)系較差，但檢測方法受體液干擾小，其靈敏度可達(dá)0.0005g/L。蛋白質(zhì)芯片在戊二醛聚合豬血紅蛋白的大鼠體內(nèi)藥代實驗應(yīng)用效果良好，用抗體芯片方法可以檢測出其在大鼠