糖化血紅蛋白五種檢測(cè)方法的評(píng)價(jià).pdf

1、目的：糖化血紅蛋白(glycosylated hemoglobin，GHb)是糖尿病(diabetic mellitus，DM)患者的診斷、血糖監(jiān)測(cè)和藥物治療效果確定的有效指標(biāo)之一，臨床上常用HbA1c的檢測(cè)代替GHb。目前，檢測(cè)HbA1c的方法很多，有高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)、電泳法、親和層析法、酶法和免疫法等。高效液相色譜法測(cè)定HbA1c具有準(zhǔn)確性和重復(fù)

2、性高的特點(diǎn)，是檢測(cè)糖化血紅蛋白的金標(biāo)準(zhǔn)。本論文將HPLC法和另外四種方法進(jìn)行比較及分析，為臨床醫(yī)師及各實(shí)驗(yàn)室在選擇不同方法檢測(cè)糖化血紅蛋白時(shí)提供參考。
　　方法：實(shí)驗(yàn)標(biāo)本正常對(duì)照組65例，其中男33例，女32例，年齡40～57歲，體重指數(shù)18～24kg/m2為本院體檢無(wú)糖尿病的健康者；糖尿病患者64例，其中男33例，女31例，年齡45～66歲，體重指數(shù)18～24kg/m2。每一份標(biāo)本在同樣條件下用五種方法檢測(cè) HbA1c，記錄測(cè)定

3、結(jié)果，用于對(duì)比分析；選擇具有醫(yī)學(xué)決定水平的正常和異常濃度的樣本，分別采用5個(gè)樣本，批內(nèi)在同一天內(nèi)重復(fù)20次；批間分別在7 d內(nèi)進(jìn)行10次測(cè)試。計(jì)算出批內(nèi)和批間的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和CV值。收集HbA1c為10.0％的糖尿病患者的抗凝血，用0.9％的生理鹽水進(jìn)行梯度稀釋，從低濃度到高濃度做直線回歸分析，觀察其線性范圍。將HbA1c為10.0%的全血標(biāo)本用0.9％的生理鹽水進(jìn)行1/5、2/5、3/5、4/5、5/5濃度稀釋，分別用五種方法檢測(cè)其H

4、bA1c濃度，然后分別在血標(biāo)本中添加56 mmol/L葡萄糖、25 mmol/L三酰甘油、3.4 mmol/L膽紅素，并用低溫凍融方法制備輕度（Hb＜1g/L）、中度（Hb1～4 g/L）以及嚴(yán)重溶血標(biāo)本（Hb＞5g/L）分別進(jìn)行測(cè)試。在各種干擾物不同濃度的影響下，如果 HbA1c的值上下浮動(dòng)0.3%，則將視為受到干擾。對(duì)比五種方法測(cè)定HbA1c的標(biāo)本量和測(cè)定時(shí)間，以及回歸方程及相關(guān)系數(shù)。
　　結(jié)果：五種方法中除外硼酸親和法，其他

5、四種方法均符合要求；相對(duì)而言，HPLC法中D-10型全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀的精密度更佳。五種方法在4.0%～14.2%范圍內(nèi)線性良好，實(shí)測(cè)值與理論值的相關(guān)系數(shù)(r)在0.971～0.996之間，其中HPLC法最好。當(dāng)加入各種干擾因素時(shí)，結(jié)果顯示HPLC法、酶法、膠乳凝集法測(cè)得的HbA1c值上下浮動(dòng)<0.2%，可見(jiàn)性能穩(wěn)定、不易受到各種干擾物的影響。電泳法受溶血影響非常大，硼酸親合法中NycoCard Reader II多功能全定量特種

6、蛋白儀對(duì)溶血標(biāo)本顯示濃度太低測(cè)不出數(shù)，脂血標(biāo)本顯示濃度太高測(cè)不出數(shù)。通過(guò)標(biāo)本量、測(cè)定時(shí)間、CV、r等指標(biāo)進(jìn)行比較，得出電泳法所采用的樣本量及測(cè)定時(shí)間均高于其他方法。酶法的r最接近1。
　　結(jié)論：HPLC法作為金標(biāo)準(zhǔn)，批內(nèi)和批間精密度在所采用的五種方法中是最好的，其次為酶法和膠乳凝集法，而硼酸親和法的重復(fù)性則相對(duì)較差，電泳法結(jié)果與實(shí)驗(yàn)人員掃描和對(duì)電泳的波峰判斷有關(guān)，主觀隨意性較大，要求實(shí)驗(yàn)人員技術(shù)嫻熟、經(jīng)驗(yàn)豐富，否則結(jié)果差異較大。H