珠芽景天的鑒定、黃酮類(lèi)成分含量測(cè)定及抗腫瘤活性研究.pdf

1、珠芽景天系景天科景天屬植物珠芽景天(別名馬尿花)SedumbulbiferumMakino的新鮮或干燥全草,是我國(guó)的一種民族民間藥。春末初夏時(shí)采收,鮮用或曬干備用。文獻(xiàn)記載,該品用于食積腹痛、風(fēng)濕癱瘓、瘧疾等病癥,尚有止血作用,在湘西土家族還用于治療癰腫疔癤、跌打損傷、燙傷、蛇傷等。珠芽景天廣泛分布于我國(guó)多個(gè)省區(qū),野生資源豐富,有一定的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。
　　關(guān)于珠芽景天的生藥學(xué)及活性研究報(bào)道很少,尚缺乏系統(tǒng)的品質(zhì)鑒定分析方法。因此,

2、筆者對(duì)該植物藥進(jìn)行了藥材性狀、顯微特征、薄層色譜、黃酮類(lèi)成分含量測(cè)定、總黃酮的提取與純化、各提取部位的體外抗腫瘤活性等方面的研究,建立了初步的質(zhì)量分析方法;并與同屬近緣植物藥(藥用植物)垂盆草、佛甲草、凹葉景天進(jìn)行了薄層色譜的比較研究,同時(shí)結(jié)合4者莖的顯微構(gòu)造的相似性,初步探討了相互之間的親緣關(guān)系。
　　性狀、顯微及薄層色譜鑒定研究表明,珠芽景天鑒別特征明顯,如莖橫切面的皮層外側(cè)及中柱薄壁組織散布有紫紅色細(xì)胞,髓部細(xì)胞較小,壁不增

3、厚(同屬部分植物莖髓部細(xì)胞壁增厚);葉下表皮氣孔密布,?？梢?jiàn)2個(gè)(有時(shí)3個(gè))相距較近;全草薄層色譜中具多個(gè)特征性熒光斑點(diǎn),并與對(duì)照品槲皮素色譜相應(yīng)位置上有相同顏色的斑點(diǎn)。相對(duì)于垂盆草、佛甲草、凹葉景天的顯微特征,珠芽景天莖橫切面內(nèi)、外側(cè)皮層細(xì)胞壁不增厚,髓部略呈類(lèi)圓形,細(xì)胞壁不增厚,以及葉上、下表皮細(xì)胞表面觀呈不規(guī)則形,壁呈顯著的波狀彎曲等特征,而易于將本品與上述三個(gè)不同來(lái)源的同屬植物藥相區(qū)別。薄層色譜中,珠芽景天、凹葉景天與垂盆草、佛

4、甲草相比,相似程度相對(duì)較小,推測(cè)與它們的親緣程度略遠(yuǎn);而垂盆草、佛甲草絕大部分色譜斑點(diǎn)(共有9個(gè)共性色譜斑點(diǎn))一一對(duì)應(yīng),加之二者莖的顯微構(gòu)造十分相近,推測(cè)二者親緣關(guān)系較為密切。
　　通過(guò)HPLC法對(duì)樣品進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)珠芽景天的水解產(chǎn)物含有槲皮素、山柰素等黃酮類(lèi)成分。故以不同采收時(shí)間的珠芽景天樣品為材料,建立了其槲皮素、山柰素成分的HPLC測(cè)定法。該法采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(YMC-PackODS-A柱,250mm×4.6

5、mm,5μm),甲醇-0.4％磷酸溶液(50:50)為流動(dòng)相,檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm,柱溫30℃,流速為1.0mL·min-1,進(jìn)樣量10μL,并進(jìn)行相應(yīng)的方法學(xué)考察。結(jié)果槲皮素、山柰素進(jìn)樣量分別在0.03～0.36μg、0.08～0.96μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系(相關(guān)系數(shù)r=0.9999),平均加樣回收率分別為98.90%、98.27%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差RSD均小于1.70%(n=6)。建立的HPLC法準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好,可用作珠芽

6、景天有關(guān)活性物質(zhì)含量控制的參考依據(jù)。同時(shí)對(duì)珠芽景天總黃酮的含量進(jìn)行了測(cè)定,測(cè)定結(jié)果表明,4月下旬的樣品中槲皮素、山柰素的含量均明顯高于5月與6月樣品,4月下旬與5月中旬樣品的總黃酮含量高于6月樣品,故初步認(rèn)為該藥材以4月下旬至5月中旬采收為宜。
　　珠芽景天總黃酮提取純化的研究表明,大孔樹(shù)脂所得的富集物黃酮含量偏低;將過(guò)大孔樹(shù)脂柱后的富集物再過(guò)聚酰胺柱,即采用大孔樹(shù)脂-聚酰胺聯(lián)用技術(shù)具有較好的富集效果,所得黃酮富集物的總黃酮含量達(dá)

7、到了52.1%,為進(jìn)一步研究珠芽景天總黃酮的藥理活性奠定了基礎(chǔ)。
　　利用四氮唑鹽還原法(MTT法),以人的腫瘤細(xì)胞(人肝癌細(xì)胞株HepG2、人食管癌細(xì)胞株EC109、人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480)為篩選模型,進(jìn)行了珠芽景天的乙酸乙酯、正丁醇提取部位及總黃酮提取物的體外抗腫瘤活性研究,結(jié)果其總黃酮提取物及乙酸乙酯提取部位對(duì)3種癌細(xì)胞株都有較好的抑制作用,其作用都隨著濃度的增加而增強(qiáng),在測(cè)定濃度范圍內(nèi)呈良好的劑量依賴(lài)性抑制作用。鑒于已知