柞蠶及家蠶卵黃原蛋白基因的克隆與序列分析.pdf

1、本論文主要包括柞蠶卵黃原蛋白基因的克隆和序列分析，家蠶卵黃原蛋白基因5’端側(cè)翼區(qū)克隆及序列分析，以及對(duì)七種絹絲昆蟲卵黃原蛋白一級(jí)結(jié)構(gòu)的特性分析。 柞蠶是吐絲結(jié)繭的經(jīng)濟(jì)昆蟲，屬于鱗翅目天蠶蛾科，有關(guān)卵黃原蛋白的研究報(bào)道很多。本文根據(jù)已經(jīng)解析出的柞蠶卵黃原蛋白cDNA序列設(shè)計(jì)特異性引物，有9對(duì)引物從柞蠶基因組DNA中擴(kuò)增出柞蠶卵黃原蛋白基因9個(gè)DNA片段，經(jīng)克隆、測(cè)序和分析后獲得柞蠶卵黃原蛋白基因序列。結(jié)果表明，柞蠶卵黃原蛋白基因包

2、含6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子，外顯子的大小分別為2258bp、205bp、982bp、879bp、184bp和829bp，內(nèi)含子的大小分別為84bp、78bp、410bp、1055bp和795bp。和其它已解析的昆蟲卵黃原蛋白基因比較可以得出，最大的不同是相對(duì)于其他昆蟲卵黃原蛋白基因在啟始密碼子ATG后31bp處有一個(gè)大的內(nèi)含子，而在柞蠶卵黃原蛋白基因中缺失，這是迄今發(fā)現(xiàn)例外的第一個(gè)昆蟲卵黃原蛋白基因。其它的內(nèi)含子所在的位置相對(duì)保守，而大小

3、則有些變化；外顯子的大小則相對(duì)比較保守。在編碼區(qū)沒有其它中斷，根據(jù)柞蠶卵黃原蛋白基因的外顯子序列，六個(gè)外顯子從起始密碼ATG到終止密碼子TAA共編碼了一個(gè)具有1778個(gè)氨基酸殘基的多肽。本研究為柞蠶乃至昆蟲與卵相關(guān)的研究和利用提供理論基礎(chǔ)。 從家蠶品種951×952基因組DNA中通過PCR方法擴(kuò)增了家蠶卵黃原蛋白基因(vitellogenin)的5’端調(diào)控區(qū)，將其克隆入pMD18-T載體中，經(jīng)鑒定和測(cè)序，并對(duì)5’端序列進(jìn)行了分析

4、。與已報(bào)道的家蠶(Tokai×Asahi)卵黃原蛋白基因5’側(cè)翼區(qū)序列比較，發(fā)現(xiàn)有4處堿基發(fā)生變化。但轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，TATA框，短回文序列等沒有變化，為以后對(duì)家蠶卵黃原蛋白基因表達(dá)調(diào)控和開發(fā)轉(zhuǎn)基因家蠶的研究奠定了基礎(chǔ)。 家蠶、天蠶、蓖麻蠶、柞蠶、野桑蠶、透目天蠶、樟蠶7種絹絲昆蟲分別屬于鱗翅目的家蠶蛾科和天蠶蛾科的不同屬。通過對(duì)7種絹絲昆蟲卵黃原蛋白一級(jí)結(jié)構(gòu)保守序列如信號(hào)肽序列、多聚絲氨酸、糖基化位點(diǎn)等的比較和分析，進(jìn)一步根據(jù)氨