柳蠶卵黃原蛋白受體基因的克隆與表達(dá)分析.pdf

1、柳蠶(ActiasseleneHubner)是一種尚未開發(fā)的野生絹絲昆蟲，屬鱗翅目，大蠶蛾科，主要分布于中國、日本、印度等東亞和東南亞。國內(nèi)外對柳蠶的研究報(bào)道較少，且大部分都是關(guān)于形態(tài)學(xué)和生物習(xí)性方面的報(bào)道和記載。
　　 在昆蟲卵發(fā)生過程中，卵黃原蛋白由脂肪體合成并分泌到體液中，被發(fā)育的卵母細(xì)胞大量攝取，作為卵發(fā)生的營養(yǎng)需要而被利用。卵母細(xì)胞對卵黃原蛋白的攝取過程通過其受體(vitellogeninreceptor/yolkpr

2、oteinreceptor，VgR/YPR)介導(dǎo)的胞吞作用而實(shí)現(xiàn)。
　　 卵黃原蛋受體屬于低密度脂蛋白受體，具有典型的LDLR保守功能結(jié)構(gòu)域。主要包括如下5個(gè)組成部分：配體結(jié)合域(Ligand-bindingdomain)、表皮生長因子前體同源域(Epidermalgrowthfactorprecursorhomologydomain)、跨膜域(Transmembranedomain)、O-連糖功能域(O-linkedcarbo

3、hydratedomain)及胞質(zhì)尾域(Cytoplasmicdomain)。
　　 本文根據(jù)已解析的家蠶及其他昆蟲的卵黃原蛋白受體cDNA序列，設(shè)計(jì)特異性引物，從柳蠶cDNA中擴(kuò)增出了卵黃原蛋白受體基因，經(jīng)克隆、測序和分析后獲得了柳蠶卵黃原蛋白受體的基因序列(GenBank登錄號(hào)：JQ809472)，基因全長5848bp，包含138bp的5'端調(diào)控區(qū)序列，271bp3'端調(diào)控區(qū)序列，ORF序列全長5439bp，信號(hào)肽位于5'端

4、由17個(gè)氨基酸組成。序列編碼1813個(gè)氨基酸，預(yù)測蛋白分子量為203.9kD。序列比對表明，柳蠶的VgR與家蠶VgR蛋白相似性最高。
　　 利用ScanProsite在線軟件分析柳蠶卵黃原蛋白受體蛋白功能域，采用PCR法擴(kuò)增了柳蠶卵黃原蛋白受體的兩個(gè)結(jié)合域LBD1和LBD2，并分別連接至pET-28a(+)表達(dá)載體，轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)菌株中，用IPTG進(jìn)行了不同濃度的誘導(dǎo)表達(dá)。經(jīng)SDS-PAGE電泳和Westernb