藏豬鏈球菌2型血清學調(diào)查及腸球菌耐藥性研究.pdf

1、豬鏈球菌病(Streptococcus suisS.Suis)是因為豬鏈球菌感染而導致的分布極其廣泛的傳染病，對養(yǎng)殖業(yè)和人類影響極大。該病含有35個血清型，其中2型(S.Suis2）發(fā)病率最高，主要以淋巴結炎、關節(jié)炎、腦膜炎及敗血癥為主要臨床特征，已被國家規(guī)定為二類動物疫病。然而在近期的臨床實踐中發(fā)現(xiàn)部分西藏林芝地區(qū)的藏豬出現(xiàn)類似于S.Suis的臨床癥狀，故此擬通過血清學調(diào)查進一步掌握該病在林芝地區(qū)藏豬的流行情況，以期為后續(xù)的防疫工作和

2、綜合性措施提供依據(jù)。
　　腸球菌(Enterococci)存在廣泛，為條件性致病菌。然而近年不科學的抗生素應用使腸球菌耐藥越發(fā)嚴重，不僅對高水平氨基糖苷類藥物耐藥，對大環(huán)內(nèi)酯類、β-內(nèi)酰胺類、四環(huán)素類及糖肽類抗生素等的耐藥率也較高，腸球菌引起的各種傳染病也隨之增多。然而，要想研究其耐藥性，分離腸球菌是必不可少的一步，而腸球菌又與其他球菌表型相似，故很難區(qū)分，加之其分布隨地區(qū)的不同而不同，西藏林芝地區(qū)對此研究甚少，故本研究就腸球菌的

3、分離鑒定及其耐藥問題展開研究。
　　本研究分別對2014年12月份到2015年1月份間在西藏林芝地區(qū)所分離的438份血清進行ELISA試驗，完成對豬鏈球菌2型在該地區(qū)陽性率的初步調(diào)查，這對增強當?shù)鼐用駥ωi鏈球菌病的防控意識，具有重要的公共衛(wèi)生學意義。同時，本研究對2015年7月到9月份及2016年6月到8月期間所采取的藏豬內(nèi)臟及糞便進行腸球菌分離，并對分離菌株進行耐藥及MIC試驗。以此為基礎，篩選出耐藥性腸球菌菌株并進行基因檢測。

4、試驗結果與結論如下:
　　1.豬鏈球菌的檢測結果
　　本試驗采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)對林芝縣及米林縣共438份血清進行檢測。檢測結果顯示:所有血清的抗體陽性率為60.05％(263/438)。其中，雌性、雄性分別為61.50％和58.96％，林芝縣與米林縣的陽性率分別為61.79％和57.81％。應用SPSS13.0軟件統(tǒng)計分析得出，在本研究中，性別及兩地區(qū)間無顯著性差異(P≥0.05)。本研究說明林芝地區(qū)藏豬

5、S.Suis2隱性感染率較高，當?shù)鼐用駪訌娫摬〉姆揽匾庾R。
　　2.藏豬源腸球菌的分離情況
　　本研究采用胰酶大豆瓊脂(Tryptic Soy Ager, TSA)固體培養(yǎng)基（加入2％兔血清，50μg/ml氨曲南及10μg/ml多粘菌素B）用于選擇性分離培養(yǎng)腸球菌，進而通過觸酶試驗并結合生化特征初步鑒定為腸球菌，最后進一步結合16SrDNA以及腸球菌特保守的tuf基因通過pcr進一步驗證得出如下結果:2015年從105個樣

6、品中共分離出51株、4種藏豬源腸球菌(48.6％):Efaecalis15株(29.4％)，Efaecium4株(7.8％)，E.hirae27株(52.9％)，E.durans2株(3.9％)及其他腸球菌3株(5.9％)，E.durans為首次在藏源豬獲得;2016年從120個樣品中共分離出45株、2種藏豬源腸球菌(37.5％):E.faecalis12株(26.7％)，Efaecium6株(13.3％)及其他腸球菌27株(60％)。

7、
　　3.腸球菌耐藥檢測情況
　　本研究通過采用K-B藥敏片法及MIC法對2015-2016年兩年分離菌株進行6類10種抗菌藥物的敏感性測定。結果顯示:所有腸球菌對卡那霉素、慶大霉素及鏈霉素高水平耐藥率高達60％到80％以上，而對萬古霉素的敏感率均為100％，紅霉素及四環(huán)素的耐藥率均接近50％。2016年與2015年相比，氨芐西林的耐藥率明顯增加。頭孢呋辛、青霉素及左氧氟沙星的耐藥率均為10％左右，敏感率較高，且兩年增減幅度

8、不大。此外，兩年份的菌株均表現(xiàn)為嚴重的多重耐藥性，尤其為糞腸球菌，高達5耐，未發(fā)現(xiàn)6耐菌株。說明當?shù)鼐用褚院髴嗉幼⒁獠⒖茖W用藥。
　　4.腸球菌耐藥基因的檢測與分析
　　結合K-B藥敏片法及MIC的結果，本研究分別對兩年份5類藥物10種耐藥基因(aac(6')-Ⅰe-aph(2')-Ⅰa,ph(3')-Ⅲa,aph(2')-Ⅰc,nt(4')-Ⅰa,ant(6')-Ⅰa,ant(3')-(9),TEM，ermB，mefA，

9、tetM)進行檢測，結果發(fā)現(xiàn):菌株的耐藥表型及耐藥基因之間并不呈正相關。比如2015年耐高水平鏈霉素菌株為31株，但并無攜帶ant(6')-Ⅰa和ant(3')-(9)的腸球菌。2015年部分菌株攜帶aac(6')-Ⅰe-aph(2')-Ⅰa，ant(4')-Ⅰa，ermB及tetM的陽性率高達100％，沒有發(fā)現(xiàn)aph(3')-Ⅲa，aph(2')-Ⅰc，ant(6')-Ⅰa，ant(3')-(9)及mefA耐藥菌株，但2016年分離的