江蘇省豬鏈球菌血清2型菌株耐藥性與分子特征研究.pdf

1、目的:
　　豬鏈球菌(Streptococcus suis，S.suis)，一種重要的人獸共患病病原菌。根據(jù)菌體莢膜多糖的多樣性，豬鏈球菌被分為35個(gè)血清型，其中豬鏈球菌血清2型（Streptococcussuis serotype2）是毒力最強(qiáng)也是世界范圍內(nèi)引起人和豬感染發(fā)病的主要病原菌，同時(shí)也是國(guó)內(nèi)最常見的致病血清型。近幾年豬鏈球菌血清2型菌引起關(guān)注不僅僅是因?yàn)樵絹碓蕉嗟膰?yán)重人間感染豬鏈球菌的報(bào)道，而且廣泛出現(xiàn)豬鏈球菌多重耐藥

2、的報(bào)道。因此了解江蘇省高致病性豬鏈球菌血清2型菌株的耐藥情況及分子特征對(duì)于人感染豬鏈球菌病的防控和治療具有重要意義。
　　方法:
　　1.收集江蘇省1998～2010年間人感染及相關(guān)的高致病性豬鏈球菌血清2型菌株，同時(shí)收集相關(guān)流行病學(xué)資料。
　　2.根據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)標(biāo)準(zhǔn)用K-B紙片法(K-B Disk Dif

3、fusion test)對(duì)臨床常用的14種抗菌藥物進(jìn)行耐藥性研究。
　　3.采用PCR方法對(duì)豬鏈球菌血清2型菌株大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥基因(ermA、ermB和mefA)、四環(huán)素耐藥基因(tet(M)，tet(O)、tet(W)、tet(O/W/32/O)、tet(L)、tet(K)和轉(zhuǎn)座子Tn916)和氨基糖苷類抗生素耐藥基因(Aph3')進(jìn)行檢測(cè)分析。
　　4.采用PCR方法檢測(cè)豬鏈球菌血清2型菌株的6種毒力基因(cps2

4、j, mrp, ef,sly,gapdh, fbps)，了解毒力基因的攜帶情況。
　　5.運(yùn)用多位點(diǎn)序列分型(Multilocus sequence typing，MLST)和多位點(diǎn)串聯(lián)重復(fù)序列分析(Multiple-locus variable number tandem repeat analysis，MLVA)兩種分子分型方法對(duì)江蘇省豬鏈球菌血清2型菌株進(jìn)行分子分型并與國(guó)內(nèi)外參考菌株進(jìn)行聚類分析。
　　結(jié)果:
　

5、　1.1998～2010年江蘇省共收集到高致病性豬鏈球菌血清2型菌株27株。其中從病人體內(nèi)分離到19株(19/27，70.4％)，從病死豬及豬肉產(chǎn)品中分離到8株(8/27，29.6％)。
　　2.分離株對(duì)鏈霉素和四環(huán)素的耐藥率最高，為100％，其次為復(fù)方新諾明，耐藥率為40.74％，對(duì)紅霉素和阿奇霉素的耐藥率為11.11％和7.41％;江蘇省豬鏈球菌血清2型菌株均對(duì)青霉素、頭孢類和氟喹諾酮類敏感。
　　3.26株菌中存在te

6、t(M)基因，在tet(M)基因陰性的菌中檢測(cè)到tet(O)基因;所有菌株均攜帶轉(zhuǎn)座子Tn916;所有菌株中均未發(fā)現(xiàn)氨基糖苷類耐藥基因(Aph3')和大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因(ermA、ermB和mefA)。
　　4.本研究中所有江蘇省豬鏈球菌血清2型分離株均攜帶6種毒力基因(cps2j+mrp+ef+sly+gapdh+ fbps)。
　　5.26株菌的MLST基因型為ST7型(1-1-1-1-1-1-3)，只有JS-26號(hào)菌為

7、ST-1型(1-1-1-1-1-1-1)。
　　6.MLVA方法將菌株分為13個(gè)基因型，大部分等位基因差異集中在TR9基因上。
　　結(jié)論:
　　1.1998年至2010年，江蘇省共收集到高致病性豬鏈球菌血清2型菌株27株。其中1998年（10株）和2005年（5株）分離到的菌株居多，這兩年也是國(guó)內(nèi)人感染豬鏈球菌病的高峰期。南通地區(qū)分離到的菌株較多（19株），這可能與當(dāng)?shù)卣?、衛(wèi)生、農(nóng)林部門對(duì)此病較重視，經(jīng)驗(yàn)較豐富有關(guān)，

8、也可能當(dāng)?shù)刎i中豬鏈球菌感染情況較嚴(yán)重。
　　2.江蘇省豬鏈球菌分離株對(duì)氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類及磺胺類藥物都具有較強(qiáng)的耐藥性，這可能與此四類抗生素在全球生豬產(chǎn)業(yè)中的廣泛使用甚至濫用有關(guān)。本研究中菌株均攜帶可產(chǎn)生核糖體保護(hù)蛋白的四環(huán)素耐藥基因(tet)，這結(jié)果和表型結(jié)果相一致。本研究中豬鏈球菌株均不攜帶氨基糖苷類抗生素耐藥基因Aph3'（3'-磷酸轉(zhuǎn)移酶）基因和大環(huán)內(nèi)酯耐藥基因(ermA、ermB和mefA)，可能與其他的耐

9、藥基因或耐藥機(jī)理有關(guān)。
　　3.本研究中所有菌株均攜帶6種毒力基因（cps2j+mrp+ef+sly+gapdh+fbps），從基因水平說明所有菌株為強(qiáng)毒株。
　　4.本研究結(jié)果顯示26株江蘇分離株為ST7型，此型也是引起1998年江蘇省和2005年四川豬鏈球菌病暴發(fā)的分子型，同時(shí)是國(guó)內(nèi)人感染豬鏈球菌的優(yōu)勢(shì)基因型。2010年從南通病人體內(nèi)分離到的一株菌（JS-26）為ST1型，2014年鹽城一病人疑似被ST1型豬鏈球菌感染，