Poly(I：C)加重碘過量誘發(fā)的NOD鼠甲狀腺炎途徑的探討.pdf

1、目的 流行病學(xué)資料顯示膳食中攝入過量碘會導(dǎo)致自身免疫性甲狀腺疾病的發(fā)生，但是其發(fā)病機制至今仍未完全闡明。臨床上有患者在病毒感染后誘發(fā)了自身免疫性甲狀腺炎的現(xiàn)象，最近有研究發(fā)現(xiàn)EB病毒，單純皰疹病毒等感染也可以誘發(fā)自身免疫性甲狀腺炎。本實驗室前期工作發(fā)現(xiàn)poly(I:C)有加重碘過量誘發(fā)的nod小鼠甲狀腺炎的現(xiàn)象，本實驗將要證實病毒感染加重碘過量所致甲狀腺炎的途徑，探討poly(I:C)對過量碘所致不同品系小鼠甲狀腺炎發(fā)病的影響及

2、其機制。 方法 本實驗選用自身免疫性疾病易感的NOD小鼠和非易感的BALB/c小鼠作為試驗動物，通過飲過量碘水復(fù)制甲狀腺炎動物模型，以poly(I:C)作為病毒類似物，觀察其對甲狀腺炎發(fā)病的影響和對碘過量引起的不同遺傳背景的動物甲狀腺炎的功能改變、浸潤淋巴細胞鑒定，炎癥因子表達變化。選用7-8周齡，雌性NOD鼠，26只隨機分為4組，對照組5只，其余每組7只；雌性BALB/c鼠，31只隨機分為4組，對照組7只，其余每組8只

3、，分別為：(1)對照組(C):無碘添加水；(2)碘過量組(HI)：飲0.05％Nal水；(3)poly(I:C)組(P):第一周每天和最后一周隔poly(I:C)5.0μg/g體重腹腔注射；(4)碘過量聯(lián)合poly(I:C)組(I+P)：飲0.05％Nal水并腹腔注射poly(I:C)，按5.0μg/g體重標準，分別于實驗第1周和最1周每F1、隔日1次。作用8周后處死：測量體重、甲狀腺重量及解剖形態(tài)；取全血，甲狀腺和脾；HE染色觀察甲狀

4、腺組織形態(tài)學(xué)變化；采用RIA法檢測血清中甲狀腺激素及甲狀腺激素刺激素水平；免疫熒光檢測甲狀腺CD3和TLR3的表達，SYBRGREEN實時熒光定量PCR法分析基因IL-4，IFN-γ和IFN-α的mRNA表達。 結(jié)果 兩品系小鼠甲狀腺相對重量在P組均無明顯變化，碘過量組和I+P組均明顯增加(P<0.01)。NOD鼠血清總T4水平在I+P組較對照組下降，同組TSH水平較對照組有所升高(P<0.05)。BALB/c小鼠各組均

5、未出現(xiàn)明顯的改變(P>0.05)。 HE染色結(jié)果顯示：NOD小鼠和BALB/c小鼠P組甲狀腺與C組比較未出現(xiàn)明顯病理變化；NOD小鼠HI組甲狀腺濾泡膠質(zhì)蓄積性擴張，大小不等，可見融合濾泡，上皮細胞呈低立方狀或扁平狀，大量淋巴細胞浸潤，呈灶性分布，其中甲狀腺濾泡受累程度I級(57.2％)、II級(42.8％)；BALB/c鼠甲狀腺濾泡擴張，大小不等，濾泡內(nèi)有膠質(zhì)潴留而未見有明顯的炎細胞浸潤；NOD鼠I+P組除有上述與HI組甲狀腺相

6、似的病變外，甲狀腺濾泡受累程度更為嚴重，出現(xiàn)III級(42.8％)，IV級(28.6％)，并有局灶纖維化。BALB/c小鼠I+P組出現(xiàn)甲狀腺濾泡擴張和膠質(zhì)潴留，較I組稍有加重，但仍未見炎細胞浸潤。 CD3免疫熒光染色顯示NOD鼠HI組和I+P組CD3陽性淋巴細胞較對照組和P組增多，呈灶性分布，而BALB/c鼠各組均幾乎見不到CD3陽性的細胞。TLR3免疫熒光檢測顯示NOD小鼠P組，HI組和I+P組甲狀腺濾泡上皮呈弱陽性，HI組和

7、I+P組并見TLR3強陽性的非濾泡上皮細胞，I+P組陽性細胞數(shù)增多最為明顯，而BALB/c鼠除I+P組有少量弱陽性細胞外其余各組均未見TLR3陽性細胞。 實時熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示，NOD鼠和BALB/c鼠甲狀腺IL4相對表達量在P組有所升高，HI組NOD小鼠升高(P<0.05)，而BALB/c鼠變化無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，I+P組NOD小鼠無明顯變化，BALB/c下降(P<0.05)；脾的IL-4的表達，NOD小鼠

8、碘HI組下降(P<0.05)其余各組無明顯變化，BALB/c鼠在HI組和I+P組升高(P<0.05)，P組未見明顯變化。NOD鼠甲狀腺中IFN-γ的表達在HI組以及I+P組均有不同程度的升高，而在P組無明顯變化(P>0.05)；BALB/c鼠的表達與NOD鼠相似HI組以及I+P組均有不同程度的升高(P<0.05)，而在P組無明顯變化(P>0.05)。脾IFN-γ的表達在NOD鼠三個實驗組均有不同程度的升高，而在BALB/c脾組織中均未見

9、明顯改變(P>0.05)。IFN-α在NOD鼠甲狀腺和脾的表達各實驗組均比對照組有明顯升高，其中I+P組表達量最高(P<0.05)。BALB/c鼠甲狀腺IFN-α的表達各實驗組也均有升高，脾IFN-α的表達HI組和I+P組升高(P<0.05)，P組未見明顯變化。 結(jié)論 1.碘過量刺激NOD鼠甲狀腺濾泡上皮細胞表達TLR3，通過TLR3途徑激活固有免疫反應(yīng)，是促發(fā)自身免疫性甲狀腺炎的重要途徑之一。 2.poly(I

10、:C)單獨作用可輕度刺激甲狀腺濾泡上皮細胞TLR3的表達，并有輕度抑制甲狀腺功能的趨勢，但未引發(fā)甲狀腺炎。 3.碘過量誘發(fā)NOD小鼠自身免疫性甲狀腺炎，甲狀腺組織表達TLR3增加，在此基礎(chǔ)上poly(I:C)作為TLR3的配體與TLR3結(jié)合，激活TLR3信號通路，使I型干擾素(IFN-α等)明顯升高，激活免疫介導(dǎo)的特定組織細胞的破壞，進一步加重炎癥反應(yīng)。 4.機體發(fā)生甲狀腺炎時甲狀腺組織中I型干擾素IFN-γmRNA表達