左乙拉西坦、托吡酯對(duì)癲癇大鼠認(rèn)知功能及海馬神經(jīng)元的影響.pdf

1、目的：癲癇作為神經(jīng)系統(tǒng)的一種常見(jiàn)疾病，引起的認(rèn)知功能損害嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量。癲癇患兒認(rèn)知功能障礙是由多因素共同作用的結(jié)果，主要包括癲癇病因、發(fā)作類(lèi)型、發(fā)作頻率、持續(xù)時(shí)間、癲癇灶部位、起病年齡、癲癇發(fā)作繼發(fā)腦部結(jié)構(gòu)和生理改變，及社會(huì)因素等?？诜拱d癇藥物(antiepileptic drugs AEDs)、作為抗癲癇治療的主要手段，其潛在對(duì)認(rèn)知功能的影響更受到關(guān)注，托吡酯(Topiramate，TPM)和左乙拉西坦(Levetira

2、cetam LEV)是治療癲癇的新型有效抗癲癇藥物，由于以往研究因動(dòng)物模型、實(shí)驗(yàn)技術(shù)及科研方法的不同，導(dǎo)致研究結(jié)論的可比性有限。本實(shí)驗(yàn)在條件一致的情況下，通過(guò)大鼠海馬區(qū)立體定向注射海人酸(kainicacid,KA)建立顳葉癲癇模型。利用顳葉癲癇大鼠模型，可以消除在人類(lèi)中存在的年齡、教育程度、病程長(zhǎng)短等混雜因素的影響，從而對(duì)學(xué)習(xí)記憶障礙進(jìn)行系統(tǒng)的研究。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)Morris水迷宮（morris water maze，MWM）觀察抗癲癇藥

3、物托吡酯和左乙拉西坦對(duì)癲癇大鼠學(xué)習(xí)、記憶的影響及海馬神經(jīng)元Bcl-2、Bax表達(dá)的影響，探討不同劑量的抗癲癇藥物對(duì)顳葉癲癇大鼠學(xué)習(xí)、記憶等認(rèn)知功能影響。
　　 方法：78只清潔級(jí)健康雄性SD大鼠適應(yīng)環(huán)境2天后，將其隨機(jī)分為正常對(duì)照組（第1組）8只、KA致癇組70只，KA致癇組再隨機(jī)分為癲癇對(duì)照組（第2組）、托吡酯20mg/kg治療組（第3組）、托吡酯40mg/kg治療組（第4組）、托吡酯80mg/kg治療組（第5組）、左乙拉西坦

4、200mg/kg治療組（第6組）、左乙拉西坦400mg/kg治療組（第7組）、左乙拉西坦800mg/kg治療組（第8組），各組10只。利用立體定位儀向大鼠右側(cè)海馬CA3區(qū)注射海人酸3ug/kg（溶于生理鹽水濃度為4ug/ul）致癇，正常對(duì)照組以生理鹽水代替。發(fā)作程度按Racine[24]分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，觀察并記錄大鼠行為變化。致癇后分別給予不同劑量的托吡酯和左乙拉西坦灌胃6周，利用行為學(xué)的觀察方法，行Morris水迷宮測(cè)試，監(jiān)測(cè)大鼠記憶功能，

5、實(shí)驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天用冷鹽水灌注，4％多聚甲醛磷酸鹽緩沖液固定及后固定，石蠟包埋。將石蠟切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色觀察大鼠海馬區(qū)Bcl-2、Bax的表達(dá)。
　　 結(jié)果采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件處理。所有計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((?)±s)表示。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用單因素方差分析和Dunnett-t檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果：定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在四天的訓(xùn)練中，癲癇對(duì)照組每天尋找平臺(tái)的時(shí)間長(zhǎng)于正常對(duì)照組，并且與正常對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。托吡酯

6、不同劑量治療組每天尋找平臺(tái)時(shí)間長(zhǎng)于癲癇對(duì)照組，并且托吡酯40mg/kg、80mg/kg治療組與癲癇對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，20mg/kg與癲癇對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在四天的訓(xùn)練中，左乙拉西坦800mg/kg治療組與癲癇對(duì)照組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，左乙拉西坦200mg/kg、400mg/kg治療組第三天尋找平臺(tái)的時(shí)間與癲癇對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果：癲癇對(duì)照組尋找平臺(tái)的次數(shù)少于正常對(duì)照組，并且與正常對(duì)照組比較

7、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。托吡酯不同劑量治療組，尋找平臺(tái)的次數(shù)，均明顯少于癲癇對(duì)照組，并且托吡酯40mg/kg、80mg/kg治療組與癲癇對(duì)照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，托吡酯20mg/kg與癲癇對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。左乙拉西坦不同劑量治療組與癲癇對(duì)照組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：各組大鼠（按分組順序正常對(duì)照組、KA癲癇對(duì)照組、托吡酯20mg/kg治療組、托吡酯40mg/kg治療組、托吡酯80mg/kg治療組、左乙拉西坦2

8、00mg/kg治療組、左乙拉西坦400mg/kg治療組、左乙拉西坦800mg/kg治療組，）Bcl-2的表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別為：2.50±0.93，2.30±0.82，3.90±1.10，8.90±2.28，9.22±1.56，4.00±1.15，9.11±1.62，10.10±1.66，癲癇對(duì)照組與正常對(duì)照組相比Bcl-2的表達(dá)未見(jiàn)明顯增加，比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，TPM20mg/kg治療組、LEV200mg/kg治療組與癲癇對(duì)照組比較表達(dá)增

9、加，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，TPM40mg/kg、80mg/kg治療組、LEV400mg/kg、800mg/kg治療組Bcl-2表達(dá)明顯增加，與癲癇對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Bax的表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)分別為：28.00±5.07，55.30±8.50，45.50±9.97，39.1±5.97，30.89±7.69，45.10±10.03，41.11±7.44，37.00±7.50，癲癇對(duì)照組與正常對(duì)照組比較Bax的表達(dá)明顯增加，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，TP

10、M20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg治療組、LEV200mg/kg、400mg/kg、800mg/kg治療組Bax表達(dá)減少，與癲癇對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：托吡酯對(duì)癲癇大鼠認(rèn)知的影響與劑量有關(guān)，低劑量的托吡酯對(duì)認(rèn)知功能無(wú)明顯影響，中劑量和大劑量的托吡酯使大鼠認(rèn)知功能下降，不同劑量的左乙拉西坦對(duì)認(rèn)知功能均無(wú)影響。不同劑量的托吡酯和左乙拉西坦抑制細(xì)胞凋亡促進(jìn)基因Bax的表達(dá)，中高劑量的托吡酯和左乙拉西坦誘導(dǎo)細(xì)