串聯(lián)重復(fù)ASO探針反向斑點雜交檢測苯丙酮尿癥.pdf

1、　　苯丙酮尿癥是一種遺傳代謝病，其遺傳方式是常染色體隱性遺傳，具有明顯的遺傳異質(zhì)性，有3種臨床類型：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。Ⅰ型苯丙酮尿癥是因為苯丙氨酸羥化酶基因突變所致；Ⅱ型和Ⅲ型又稱非經(jīng)典型苯丙酮尿癥，是由于四氫生物喋呤合成和循環(huán)中的缺陷，分別由編碼二氫生物喋呤還原酶和6-丙酮酰四氫生物喋呤合成酶的基因突變引起。在中國人中，經(jīng)典型苯丙酮尿癥占94％左右，非經(jīng)典型苯丙酮尿癥6％?！　⊥ㄟ^新生兒篩查可以檢出苯丙酮尿癥，早期開始飲食治療，可獲得較

2、好的臨床結(jié)果。但不同的遺傳類型治療途徑不同，對于Ⅰ型苯丙酮尿癥，需要限制食物中的苯丙氨酸含量；而對于Ⅱ型和Ⅲ型苯丙酮尿癥，必須應(yīng)用四氫生物喋呤治療，低苯丙氨酸飲食治療無效。在產(chǎn)前診斷中，也需要針對不同的類型進行相關(guān)基因的檢測。因此臨床上需要對苯丙酮尿癥進行鑒別診斷?！　≈袊酥写蟛糠值腜AH基因突變已經(jīng)明確，非經(jīng)典型苯丙酮尿癥的突變絕大部分為6-丙酮酰四氫生物喋呤合成酶基因突變。本研究是利用PCR技術(shù)特點、寡核苷酸探針雜交原理，建立一

3、種快速、準確、簡便的雜交方法，直接檢測苯丙酮尿癥病人的基因突變，進行鑒別診斷，為臨床治療提供依據(jù)，為產(chǎn)前診斷提供新的途徑?！　♂槍χ袊酥谐Ｒ姷腜AH和PTPS基因的8個突變點，即：PAH基因的IVS4(nt+1)G→A、204TAT→TGT、243CGA→CAA、356TAC→TAA、399GTA→GTT、413CGC→CCC、和PTPS基因cDNA259C→T、286G→A，本課題設(shè)計了8對引物；通過PCR擴增、克隆，成功制備了這