丙型肝炎病毒NS4B對(duì)肝細(xì)胞相關(guān)致癌機(jī)制的研究.pdf

1、Y783998中圖分類號(hào)：R3742；Q26瀘糾壓爹陀研究生碩士學(xué)位論文丙型肝炎病毒NS4B對(duì)肝細(xì)胞相關(guān)致癌機(jī)制的研究研究生姓名匿霞學(xué)科、專業(yè)凼型堂導(dǎo)師姓名至昌王熬援二Oo五年五月經(jīng)多聚賴氨酸處理的蓋玻片上，置于37℃、5％C02孵箱中培養(yǎng)24小時(shí)。PBS洗細(xì)胞三次。10％中性甲醛固定細(xì)胞30分鐘，PBS洗5mill3次。O3％Tfitoll)(100通透細(xì)胞30分鐘，PBS洗5miIlX3次。過(guò)氧化物酶阻斷劑孵育10分鐘，PBS洗5m

2、in3次。非免疫性動(dòng)物血清中孵育10分鐘。分別加cMyc及ras蛋白一抗4℃冰箱過(guò)夜，以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。PBS洗5min3次。生物素標(biāo)記的二抗中孵育10分鐘，PBS洗3rnin3次。加SP復(fù)合物孵育10分鐘，PBS洗3皿n3次。DAB顯色，蘇木素復(fù)染，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下觀察，照相。(2)原位雜交法分別檢測(cè)空白載體組、轉(zhuǎn)染NS4B組、轉(zhuǎn)染P53組、共轉(zhuǎn)染NS4B及P53組的P53mRNA表達(dá)情況：將

3、PCXN2組、PCXN2NS4B組、PC)(N2P53組及共轉(zhuǎn)染組細(xì)胞分別消化接種于經(jīng)多聚賴氨酸處理的蓋玻片上，置于37℃，5％C02孵箱中培養(yǎng)24小時(shí)。細(xì)胞長(zhǎng)好后01MPBS(PH74)洗2min3次固定液為4％多聚甲醛／o1MPBS(PH7276)，含有1／1000DEPC。室溫固定30min。蒸餾水充分洗滌。30％H2021份純甲醇50份混合，室溫處理30miIl。蒸餾水洗滌3次。暴露mRNA片段：切片上滴加3％檸檬酸新鮮稀釋的胃