丙型肝炎病毒部分非結(jié)構(gòu)區(qū)蛋白B細(xì)胞表位的研究.pdf

1、丙型肝炎病毒（HCV）是導(dǎo)致非胃腸道傳播的肝炎的主要致病原.為單股正鏈RNA病毒,3.000多個氨基酸的前體蛋白切割后分為結(jié)構(gòu)區(qū)與非結(jié)構(gòu)區(qū)蛋白,HCV的非結(jié)構(gòu)蛋白在病毒的復(fù)制及成熟中發(fā)揮重要的作用.如NS3的絲氨酸蛋白酶,NS5B的RNA聚合酶等,它們在體內(nèi)也能引起很強的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng).機(jī)體識別B細(xì)胞表位激發(fā)的抗體在介導(dǎo)病毒粒子清除,誘導(dǎo)有效細(xì)胞免疫應(yīng)答等方面發(fā)揮作用.噬菌體展示技術(shù)已被證明為研究蛋白質(zhì)與其配體相互關(guān)系很有效的工具,

2、在該實驗中,我們建立了以噬菌體展示技術(shù)為核心的研究病毒B細(xì)胞表位的平臺,實驗過程包括作為HCV非結(jié)構(gòu)區(qū)蛋白抗原及特異多抗的制備,肽庫的篩選,基于噬菌體PIII蛋白結(jié)構(gòu)域I-II系統(tǒng)目的肽的性質(zhì)的研究.1.HCV部分非結(jié)構(gòu)區(qū)蛋白抗原的制備,這部分是全部工作的前提與基礎(chǔ),經(jīng)過多個表達(dá)系統(tǒng)的嘗試后,三個非結(jié)構(gòu)區(qū)蛋白,包括HCV NS3C/NS4（氨基酸序列1602-1811）、NS5AB（氨基酸序列2263-2497）,NS5B-dc21（氨

3、基酸序列2420-2989）得到了成功表達(dá).HCV NS3C/NS4蛋白是以硫氧還蛋白融合表達(dá)的方式獲得的.2HCV部分非結(jié)構(gòu)區(qū)蛋白B細(xì)胞表位的篩選,利用噬菌體隨機(jī)展示十二肽庫研究蛋白質(zhì)的抗原表位.首先是作為篩選分子的特異多抗的制備,將純化的三種HCV非結(jié)構(gòu)區(qū)蛋白耦聯(lián)Sepharose4B.3.對所獲B細(xì)胞表位的進(jìn)一步研究.設(shè)計了一種新穎的方法研究篩選得到的B細(xì)胞表位的性質(zhì),我們使用的伏庫隨機(jī)肽位于噬菌體PIII蛋白的N端,利用基因工程