小鼠H22肝癌細(xì)胞肺高轉(zhuǎn)移株的建立及其生物學(xué)特性的測定和RhoC基因的表達(dá).pdf

1、目的:建立小鼠H22肝癌細(xì)胞肺高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株并測定其相關(guān)生物學(xué)特性和RhoC基因的表達(dá)，為研究轉(zhuǎn)移相關(guān)分子機(jī)制提供經(jīng)濟(jì)實(shí)用的模型。
　　 方法:將小鼠H22肝癌細(xì)胞(簡稱為M0)接種于小鼠腹腔形成腹水瘤，取腹水瘤細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注射，待其肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)形成后，取其肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)處肝癌細(xì)胞再次腹腔接種、形成腹水瘤，再尾靜脈注射，反復(fù)進(jìn)行此操作后獲得第四代肺高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞(簡稱為M4)。檢測M4在昆明小鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力、體外細(xì)胞增殖能力、計(jì)算細(xì)胞倍

2、增時(shí)間、計(jì)數(shù)細(xì)胞分裂指數(shù)、Giemsa染色觀察其染色體形態(tài)、用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期分布，并與M0比較。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法測定M4細(xì)胞RhoC基因mRNA的表達(dá)水平，并應(yīng)用Imagequant軟件進(jìn)行比較分析。
　　 結(jié)果:肺高轉(zhuǎn)移H22細(xì)胞M4與M0相比較，尾靜脈注射后在第30天和40天，M4肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)總體積明顯大于M0；M0與M4細(xì)胞體外培養(yǎng)24h、36h、48h、60h及72h，P值均小于0.05，

3、范圍從3×10-9至7.2×10-26，M4細(xì)胞濃度明顯高于M0；M0細(xì)胞倍增時(shí)間為71.98h，而M4細(xì)胞倍增時(shí)間縮短縮短為44.10h；M4細(xì)胞分裂指數(shù)大于M0(P=0.014)；M4細(xì)胞周期G0/G1期比例較M0減少(P=0.024)，S期比例增多(P=0.022)；染色體數(shù)目無差異，但高轉(zhuǎn)移H22細(xì)胞染色體存在明顯異型性。高轉(zhuǎn)移細(xì)胞RhoC基因mRNA的表達(dá)高于M0細(xì)胞，M0細(xì)胞RhoC基因與GAPDH基因表達(dá)比值為0.486±