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文檔簡介
1、核受體,又叫核受體超家族(nuclear receptor superfamily)屬于配體活化的轉(zhuǎn)錄因子,廣泛參與了包括胚胎發(fā)育、細胞分化和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等生理過程.為進一步深入研究"孤兒"受體ERRα1與乳腺癌的關(guān)系,弄清ERRα1參與基因表達調(diào)控的詳細機理特別是核受體輔活化子在其中的作用,我們進行了如下的研究:1.利用基于酵母Gal4轉(zhuǎn)錄因子的雙雜交系統(tǒng),以ERRα1的LBD為"誘餌"篩選了人乳腺組織cDNA文庫.快速骨骼肌型肌鈣蛋白
2、I(fast skeletal muscle troponin I,troponin I2,TNNI2)與包括SRC-1在內(nèi)的一些已知輔活化子蛋白質(zhì)一起被篩選出來.2.應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)研究TNNI2與多種核受體的相互作用.結(jié)果表明,TNNI2與PR、TR和RXR等多種核受體存在配體依賴的相互作用;與mERRα和hERRα1等"孤兒"核受體的相互作用為配體非依賴,其中TNNI2與hERRα1的相互作用最強.并且,TNNI2與核受體的相互
3、作用依賴于核受體AF-2功能性結(jié)構(gòu)域的完整性.3.在哺乳細胞瞬時共轉(zhuǎn)染實驗中,TNNI2顯示了對核受體ER、ERRα1、SF1和ARP1反式激活功能的輔助活化作用,但單獨的TNN2并不顯著改變蟲熒光素酶(luciferase)報告基因的轉(zhuǎn)錄效率.這些結(jié)果證實了TNNI2具有核受體輔活化子的功能.4.研究體外蛋白質(zhì)相互作用的GST捕獲實驗也證實了TNNI2與ERRα1的直接相互作用.5.在證實了TNNI2與核受體存在相互作用并能輔助活化核
4、受體的反式激活作用的情況下,我們進一步采用缺失突變技術(shù),利用酵母雙雜交實驗證明了TNNI2與核受體的相互作用定位于TNNI2蛋白的1-128氨基酸殘基,這一區(qū)域包括TNNI2的氨基末端、抑制區(qū)和LXXLL模體(motif)即NR盒.哺乳細胞瞬時共轉(zhuǎn)染實驗也證實,TNNI2<,1-128>缺失突變體能夠通過與野生型TNNI2競爭核受體的結(jié)合,顯示其作為TNNI2負顯性抑制劑的功能.這一結(jié)果進一步證實1-128氨基酸區(qū)域確實是TNNI2的核
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