綠膿桿菌外毒素轉位結構域的結構與ImmunoGrB融合蛋白腫瘤殺傷功能關系的研究.pdf

1、將治療性的蛋白或基因有效的導入細胞,從而達到藥物或者基因治療的目的,是治療惡性腫瘤一直的研究領域.但由于細胞膜的通透性低,使得這一方法困難重重.效應分子能否有效地通過細胞的膜性結構,也是當今惡性腫瘤的基因治療中首先要解決的問題.近年來發(fā)現的一些蛋白或其某部分結構域可以穿越細胞的膜性結構,將效應分子運送到細胞漿甚至細胞核,并稱這種具有轉位功能的蛋白或者多肽為轉位蛋白或細胞穿透肽.該文構建了編碼三種包含不同長度PE轉位結構域:1)PE(27

2、5-358aa);2)PE(275-280aa);3)無PE的重組抗體粒酶B基因(e23sFv-PEⅡ-GrB),即將不同截短型PE轉位結構域的N端和C端分別與針對HER-2的單鏈抗體基因和活性型的granzymeB(GrB)基因相連,或將單鏈抗體基因直接與GrB基因相聯接并將它們命名為ImmunoGrB(PE275-358)、ImmunoGrB(PE275-280)和ImmunoGrB(PE-null),均與PE轉位結構域為253-3

3、58aa的ImmunoGrB(PE253-358)進行比較.該文進一步將含有ImmunoGrB(PE253-358)基因構建到重組逆轉錄病毒載體上,獲得pLNCX-ImmunoGrB(PE253-358)(PE253-358),轉染進PA317細胞系進行包裝,獲得了滴度較高的單克隆包裝細胞株.應用含ImmunoGrB基因的逆轉錄病毒體外感染T淋巴細胞進行,然后將感染后得到的T淋巴細胞經尾靜脈注射裸鼠,體內抑瘤實驗,觀察到該方法可以使裸鼠