新型輸精管節(jié)育器材料——(絡合銅納米高分子復合材料)的生物相容性研究.pdf

1、本研究分為三部分：
　　 第一部分：絡合銅納米高分子復合材料的體外細胞毒性試驗
　　 目的：利用體外細胞培養(yǎng)技術，對絡合銅納米高分子復合材料（以下簡稱絡合銅材料）的細胞毒性進行研究，為其臨床應用提供實驗依據(jù)。
　　 方法：分別采用間接接觸法（MTT法）和直接接觸法評價絡合銅材料的細胞毒性。MTT法：采用體外培養(yǎng)的小鼠成纖維細胞（L929），在培養(yǎng)液中分別添加不同濃度的絡合銅材料浸提液（25%、50%和100%），

2、于接種后第2、4、7 d通過MTT法顯色，在酶標儀492 nm波長處測定吸光度值，計算細胞相對增殖率，對絡合銅材料的細胞毒性進行評價；直接接觸法：將L929細胞與絡合銅材料直接接觸培養(yǎng)，逐日用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)學發(fā)生的變化，評價絡合銅材料的細胞毒性。
　　 結果：在培養(yǎng)各時間點除陽性對照組毒性為4級（細胞增殖率為0～20%）外，其余均為0或1級（細胞相對增殖率>90%），除陽性對照組外，各實驗組及陰性對照組OD值均隨培養(yǎng)天數(shù)

3、的增加而升高，培養(yǎng)2，4，7 d時陽性對照組的OD值明顯低于其他組（P<0.01），陰性對照組與實驗組間無顯著差異（P>0.05）。L929細胞在絡合銅材料表面粘附生長，隨時間推移，粘附細胞數(shù)量增加，細胞數(shù)量及形態(tài)與陰性對照組比較無明顯差異，評分絡合銅材料的細胞毒性為0 級。
　　 結論：絡合銅材料無明顯細胞毒性，具有良好細胞相容性，是一種具有發(fā)展前景的輸精管節(jié)育器材料。
　　 第二部分：絡合銅納米高分子復合材料的急性全

4、身毒性試驗
　　 目的：通過小鼠腹腔注射絡合銅材料浸提液，以判斷該材料的急性全身毒性作用。
　　 方法：選20只20 g左右的健康小白鼠，雌雄各半，隨機分2組，記錄初始體重。實驗組小鼠腹腔注射絡合銅材料的生理鹽水浸提液，劑量為50ml/kg，對照組注射生理鹽水。注射后24、48及72 h觀察小鼠一般狀態(tài)及毒性表現(xiàn)和死亡數(shù)及體重變化。并于試驗結束后抽取小鼠靜脈血檢測血液學指標。
　　 結果：三天觀察期內小鼠無死亡，

5、各組動物未見中毒癥狀或不良反應，體重明顯增加。實驗組和對照組小鼠體重增長均無明顯差異（P>0.05）。實驗組與對照組血液學指標ALT、AST、TP、ALB、GLU、BUN和CRE，比較差異無顯著性（P>0.05）。
　　 結論：絡合銅材料無急性全身毒性反應。
　　 第三部分：絡合銅納米高分子復合材料的肌肉植入試驗
　　 目的：通過將絡合銅材料植入新西蘭白兔背部肌肉內，觀察植入后不同時期該材料周圍組織反應情況，以評

6、價材料在肌肉組織中的組織反應程度。
　　 方法：將絡合銅材料植入新西蘭大耳白兔（共15只）脊柱一側肌肉，對側假手術，每側各選擇4個植入點，每點間隔2 cm，將材料送入深度1～2 cm的肌肉內，縫合肌肉及皮膚，植入1、4、12 W分別處死各5只，取出脊柱兩側肌肉，肉眼觀察植入部位有無皮下和肌肉組織異常病變。同時切取包裹材料樣品周圍0.5～1 cm的肌肉組織，伊紅－蘇木精染色，光學顯微鏡下觀察，比較試驗材料植入部位周圍組織反應情況以

7、及纖維囊腔厚度、炎癥細胞和其他細胞存在情況、材料組織界面處的其他異常情況。
　　 結果：植入1W時，機體表現(xiàn)為急性炎癥反應，絡合銅材料局部組織的炎性細胞反應為Ⅳ級，未形成完整纖維包囊。4W以后急性炎癥反應逐漸消失，表現(xiàn)為中性粒細胞逐漸消失，代之以少量的淋巴細胞，組織-材料界面有致密的纖維囊腔形成，炎性細胞反應為Ⅱ級，囊腔反應為Ⅲ級。12W后囊腔趨于穩(wěn)定，炎性細胞及囊腔反應均為Ⅰ級。
　　 結論：絡合銅材料植入肌肉局部組織