腫瘤細(xì)胞中microRNA的差異表達(dá)及miR-17-5p對(duì)ES-2和K562細(xì)胞生長的影響.pdf

1、目的：microRNA是一類新發(fā)現(xiàn)的具有調(diào)控功能的小RNA分子，通過調(diào)節(jié)基因的表達(dá)在生物發(fā)育、脂肪代謝、細(xì)胞分化、增殖和凋亡等過程中發(fā)揮重要作用。而在人類腫瘤中某些miRNA表達(dá)水平異常或發(fā)生突變，提示這類小的核酸分子可能發(fā)揮類似癌基因或抑癌基因的作用。本實(shí)驗(yàn)旨在通過微陣列技術(shù)分析miRNA在六種類型腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)差異，然后對(duì)某一特殊miRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展中可能功能進(jìn)行深入研究，為進(jìn)一步探討miRNA在腫瘤中發(fā)揮的作用及其在朋，瘤治

2、療中的應(yīng)用提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法： 1．利用miRNA表達(dá)譜芯片檢測六種腫瘤細(xì)胞株：HeLa、K562、ES-2、MCF-7、HT-29和A549中miRNA表達(dá)差異，并用RT-PCR、Northern blot進(jìn)行驗(yàn)證。 2．利用反義核酸技術(shù)封閉ES-2和K562細(xì)胞中高表達(dá)的miR-17-5p，利用MTT法和細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測細(xì)胞的生長變化。 3．用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期改變，用TUNEL檢測是否引

3、起細(xì)胞凋亡。 4．mRNA表達(dá)譜芯片檢測封閉miR-17-5p后ES-2細(xì)胞mRNA表達(dá)水平變化，利用生物信息方法預(yù)測miR-17-5p可能的靶基因，分析封閉miRNA后細(xì)胞生長變化可能的作用機(jī)制。 結(jié)果： 1．miRNA表達(dá)譜芯片檢測到六種腫瘤細(xì)胞中115種miRNA存在明顯差異，91種miRNA沒有明顯差異。其中，miR-21在六種腫瘤細(xì)胞表達(dá)水平均較高；miR-125b表達(dá)水平均較低；miR-17-5p和m

4、iR-20a呈集簇表達(dá)，在ES-2細(xì)胞中的表達(dá)水平高于其它細(xì)胞；let-7不同亞型在六種細(xì)胞系中表達(dá)水平較低；MCF-7和HeLa中miRNA表達(dá)譜聚為一類。 2．Northern blot、RT-PCR方法驗(yàn)證與miRNA表達(dá)譜芯片檢測結(jié)果基本一致。 3．miR-17-5p被封閉后，ES-2細(xì)胞生長受到抑制，TUNEL檢測到細(xì)胞發(fā)生凋亡；K562細(xì)胞生長受到抑制，F(xiàn)ACS檢測細(xì)胞發(fā)生S期阻滯。 4．mRNA表達(dá)

5、譜芯片檢測到miR-17-5p被封閉后ES-2細(xì)胞內(nèi)mRNA表達(dá)水平發(fā)生變化。其中E2F1、CHAF1A、COX7A2L、HECA、VPS26、YES1是生物信息方法預(yù)測到的靶基因，而且表達(dá)水平發(fā)生變化。 5．miR-17-5p可能通過負(fù)性調(diào)控E2F1參與細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期調(diào)控。 結(jié)論： 1．不同腫瘤類型中miRNA的表達(dá)存在差異。 2．miR-17-5p可能通過調(diào)控凋亡或細(xì)胞周期等過程參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展