花粉管通道法將線性化植酸酶基因?qū)胗衩鬃越幌档难芯?pdf

1、本論文的研究目的是利用基因工程手段培育具有生物安全性的轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米，使其降解植酸、釋放無機磷，從而使轉(zhuǎn)基因玉米成為高附加值的動物飼料，提高單胃動物對磷的利用率，降低植酸磷對環(huán)境的污染。 我們構(gòu)建了僅含有啟動子序列、植酸酶基因和終止子序列的線性基因轉(zhuǎn)化元件(UPN)及其兩端分別帶有T-DNA邊界序列(T-UPN)或一段載體序列(V-UPN)的不同線性轉(zhuǎn)化元件，不含選擇性標(biāo)記基因和載體骨架序列，采用花粉管通道法對選定的玉米品種進

2、行轉(zhuǎn)化，共計收獲的可以檢測的種子為20400粒。 對728株T1代轉(zhuǎn)化玉米的PCR檢測結(jié)果表明，UPN、T-UPN、V-UPN三個轉(zhuǎn)化元件的陽性率分別為0.44﹪、2.2﹪和1.8﹪，平均轉(zhuǎn)化率為1.5﹪。檢測時，以種子在果穗上的不同位置分別播種、檢測，結(jié)果表明，PCR陽性株都是來源于第五圈至第九圈的種子，這個部位的陽性率達(dá)到3.57﹪，說明花粉管通道法轉(zhuǎn)化玉米的成功率與種子所處的位置有關(guān)。本實驗結(jié)果還表明，玉米授粉后20個小時

3、左右是最佳轉(zhuǎn)化時間，而轉(zhuǎn)化成功率在玉米的不同株系間沒有明顯的區(qū)別。 Southern-blot結(jié)果證明，外源植酸酶基因已經(jīng)整合到玉米基因組中。RT-PCR和植酸酶比活結(jié)果說明外源基因在植株內(nèi)實現(xiàn)了RNA水平和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)。 上述結(jié)果表明，通過花粉管通道法進行無載體無選擇標(biāo)記基因的線性化基因轉(zhuǎn)化玉米是可行的，這一技術(shù)解決了選擇標(biāo)記基因和載體骨架序列帶來的安全隱患。本研究獲得的轉(zhuǎn)植酸酶基因玉米材料，為選育出高植酸酶玉米品