用花粉管通道法將豌豆DNA導(dǎo)入小麥及其后代的分子驗(yàn)證.pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文用花粉管通道法將豌豆DNA導(dǎo)入小麥及其后代的分子驗(yàn)證姓名：張立申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：王憲澤2002.6.1張立： 用花粉管通道法將豌豆D N A 導(dǎo)入小麥及其后代的分子驗(yàn)證摘要在我國小麥產(chǎn)量已處于較高水平的前提下，改善和提高小麥品質(zhì)就成為育種工作者一項(xiàng)迫切的任務(wù)。本研究通過花粉管通道法將豌豆基因組D N A導(dǎo)入高產(chǎn)低蛋白小麥品種魯麥2 2 號，以期提高其蛋白質(zhì)含量，并探討該方法在改

2、良小麥品質(zhì)方面的作用。以篩選的變異體T 2 2 0 X 為材料，對其醇溶蛋白、同工酶表達(dá)和D N A 水平上的差異以及蛋白質(zhì)含量的變化等方面進(jìn)行了研究。f 獲得了如下結(jié)果：1 ． 種子醇溶蛋白電泳結(jié)果顯示，變異體T 2 2 0 X 酶帶與受體魯麥2 2 號相比，既有新的酶帶增加，也有酶帶缺失的情況。說明外源D N A 的導(dǎo)入影響到醇溶蛋白組分的變化，根據(jù)醇溶蛋白基因定位，初步認(rèn)定外源D N A 影響到小麥的第一或者第六號染色體。2 ．

3、小麥幼苗期過氧化物酶活性的測定顯示，變異體T 2 2 0 X 的酶活性高于受體魯2 2 ；過氧化物酶電泳顯示，T 2 2 0 X 和魯2 2 過氧化物酶在酶帶深淺和數(shù)目方面都存在差異，說明外源遺傳物質(zhì)已影響到過氧化物酶的變化。3 ． R A P D 分析結(jié)果顯示，變異體T 2 2 0 X 和受體魯2 2 在D N A 水平上存在較大差異。經(jīng)引物S 1 0 3 擴(kuò)增，在變異體I “ 2 2 0 1 中出現(xiàn)8 5 0 b p 的特異片段；引

4、物$ 7 4 在變異體T 2 2 0 2 中擴(kuò)增出1 5 0 0 b p 和4 0 0 b p 的兩條新帶：引物$ 6 4 在變異體T 2 2 0 3 中擴(kuò)增出兩條新帶，大小分別為9 8 0 b p 和5 5 0 b p ；引物s 1 1 8 在變異體T 2 2 0 4 擴(kuò)增出一條4 8 0 b p 的新帶。這可能是外源D N A 片段整合進(jìn)受體的基因組中，改變基因的順序或者引起基因堿基的缺失、插入，從而在基因水平上發(fā)生突變。4 ． 蛋