益元康方中靈芝總多糖、總?cè)铺崛〖兓に囇芯?pdf

1、目的：研究益元康方中靈芝中具有免疫調(diào)節(jié)作用的總多糖、總?cè)?，進(jìn)行提取、篩選和分離純化，優(yōu)選最佳工藝參數(shù)，為進(jìn)一步利用細(xì)胞模型進(jìn)行體外免疫學(xué)研究打下基礎(chǔ)。
　　方法：（1）以靈芝中總?cè)?、靈芝酸A為考察指標(biāo)，采用紫外-可見分光光度法建立靈芝總?cè)频暮繙y定方法；采用 HPLC法建立靈芝酸A含量測定方法（2）搜集不同產(chǎn)地、不同批號的靈芝，以靈芝酸 A、靈芝酸 G為對照品，靈芝酸 A為參照物建立靈芝藥材的指紋圖譜并進(jìn)行聚類分析；（3）通

2、過正交實驗研究總多糖的提取工藝及醇沉工藝，確定最佳工藝參數(shù)；通過單因素實驗和均勻設(shè)計研究總?cè)频奶崛」に?，確定總?cè)铺崛∽罴压に噮?shù)；（4）通過對不同類型的大孔吸附樹脂吸附、解吸性能的考察，優(yōu)選出最佳樹脂，并在單因素實驗的基礎(chǔ)上結(jié)合正交設(shè)計、均勻設(shè)計確定總多糖、總?cè)萍兓に噮?shù)。
　　結(jié)果：（1）靈芝藥材含量測定方法研究：建立靈芝總?cè)啤㈧`芝酸 A含量測定方法。（2）靈芝藥材指紋圖譜研究：10批合格靈芝藥材指紋圖譜中，以靈芝酸

3、A、靈芝酸 G為對照品，共標(biāo)定出31個共有峰，共有峰面積占總峰面積比值平均值為71.77％；聚類分析將10批靈芝藥材共分為4類，不同產(chǎn)地靈芝有顯著差異。（3）靈芝總多糖、總?cè)铺崛」に囇芯浚红`芝總多糖的提取工藝為：12倍量水，提取3次，每次2h，提取率可達(dá)到83.87%；總多糖的醇沉工藝為：相對密度1.05，含醇量80%，醇沉24h，醇沉后粗粉中多糖含量達(dá)25.76%；總?cè)铺崛」に嚍椋?倍量，90%乙醇，提取3次，每次100min，提

4、取率達(dá)88.39%。（4）靈芝總多糖、總?cè)萍兓に囇芯浚哼x擇 AB-8作為純化靈芝總多糖的最佳樹脂，優(yōu)化的工藝參數(shù)為：上樣液濃度2.0mg·ml-1，上樣液PH=7，上樣流速1.0ml·min-1，上樣徑高比為1:8，上樣量2.0BV；洗脫劑為30%乙醇，洗脫用量3BV，洗脫液PH=8，洗脫流速1.0ml·min-1，純化后總多糖的富集程度為47.21%，提高了23.95%；選擇HPD-400作為純化靈芝總?cè)频淖罴褬渲瑑?yōu)化的工藝參