海地瓜總皂苷提取純化工藝及生物活性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、海洋中蘊涵著豐富的天然資源,是一個巨大的天然藥庫,人類在面臨著各種疑難雜癥、頑固疾病的嚴重挑戰(zhàn)以及陸地藥源越來越不能滿足人們需求的前提下,海洋寶貴的資源無疑是人類最青睞的選擇,許多國家已經越來越重視海洋中天然產物的研究和開發(fā)。我國海域遼闊,海洋物產豐富,并且具有悠久的海洋用藥歷史,擁有天然的優(yōu)勢。為在國際舞臺中爭得一席,發(fā)展海洋藍色藥物對我國來說無疑具有重要戰(zhàn)略意義。海參作為一種食品和藥材,具有很高的保健功能和藥用價值。海參皂苷是海參體

2、內的一種次生代謝產物,具有廣泛的生理藥理活性,潛藏了極大的應用價值。本文以海地瓜為研究對象,研究了其總皂苷的提取分離純化工藝,并進行了部分藥理學活性分析,為海地瓜的綜合開發(fā)利用提供理論依據。
   (1)對海地瓜體壁的基本成分進行分析,得出結果為:水分含量89.64%,蛋白質含量7.93%,折合干重達76.54%,總糖含量0.22%,粗脂肪含量0.02%;灰分含量1.76%;氨基酸組成總量達8.22%,除去組成粗蛋白的氨基酸外,

3、還有0.29%的游離氨基酸,其中甘氨酸含量最高,甲硫氨酸含量最低,必需氨基酸有7種,總含量為1.96%,非必需氨基酸有9種,總含量為6.26%,氨基酸組成較為完善,說明海地瓜的營養(yǎng)價值較高,是一種高蛋白低脂肪的食品。此外,以人參皂苷Re為標準對照,香草醛.冰醋酸.高氯酸做為顯色體系,建立海地瓜皂苷含量測定方法,光譜掃描得到了最佳參比波長537 nm,線性回歸方程為y=0.0038x+0.0071,r=0.9996,表明濃度在40~200

4、μg/mL之間與吸光度值呈良好線性關系,加標回收率為101.9%,RSD=4.63%,精密度實驗RSD=1.77%,穩(wěn)定性實驗RSD=3.16%,重復性實驗RSD=3.15%,說明方法學各指標均符合要求。應用該方法來分析不同提取方法及前處理對海地瓜總皂苷的提取效果,結果表明醇提法提取效果最好,鮮品海地瓜經醇提的皂苷得率為0.036%,冷凍干燥處理的干品海地瓜經醇提的得率最高,達0.514%。
   (2)對海地瓜體壁總皂苷的提取

5、工藝進行優(yōu)化,采用鮮品醇提法。海地瓜總皂苷提取工藝單因素試驗結果為:乙醇濃度70%,提取溫度70℃,提取時間3h,提取次數3次,料液比1:2.0 g/mL。海地瓜總皂苷提取工藝響應面分析結果:乙醇濃度為75%,提取溫度為73.5℃,提取時間為165 min,料液比為1:1.8 g/mL,共提取3次。在該條件下重復實驗3次測得平均皂苷得率為0.0378%。
   (3)對海地瓜總皂苷的純化工藝進行探討,比較了三種型號樹脂(D101

6、、AB-8、DM130)對海地瓜粗提液的分離純化效果,篩選出D101大孔樹脂為最合適的樹脂型號,以D101型號大孔樹脂對海地瓜粗提液靜態(tài)吸附一解析工藝進行研究,得出最佳條件為:稱取已處理過的經真空抽濾的D101大孔樹脂1.0 g,加入質量濃度為4.0 mg/mL樣品液60 mL,放恒溫搖床中(25℃,120 r/min)振蕩吸附90 min,過濾,樹脂用蒸餾水反復沖洗,真空抽濾,先加入30%乙醇去除雜質,過濾,再用60 mL濃度為80%

7、的乙醇進行解析,于恒溫搖床中(25℃,120 r/min)振蕩120 min。所得皂苷純度約為51.4%。以D101型號大孔樹脂對海地瓜粗提液動態(tài)吸附-解析工藝研究,得出最佳條件為:取濃度為3.6 mg/mL海地瓜皂苷粗提液160 mL上柱,上樣流速為2.5 mL/min,依次用140 mL去離子水洗去水溶性雜質,140 mL30%乙醇溶液去除雜質,150 mL90%乙醇溶液洗脫海地瓜總皂苷,洗脫流速均為1.5mL/min。所得皂苷純度

8、達71.3%。
   (4)對海地瓜總皂苷進行溶血試驗和急性毒理試驗,結果為:海地瓜總皂苷具有極強的溶血性,在終濃度為2.5μg/mL時便開始出現溶血,并隨濃度的增加,溶血率快速上升。而溶血性主要是發(fā)生在前60 min,表明溶血速度很快。小鼠急性毒理試驗結果為最大耐受劑量為8000 mg·kg-1,在此劑量以下海地瓜總皂苷經口服相對安全。試驗表明海地瓜總皂苷不適合用于臨床注射,經口服用比較安全。
   (5)對海地瓜總皂

9、苷進行抗氧化活性研究.結果為:海地瓜總皂苷清除O2·-、·OH的能力及其還原力均很弱,但在對小鼠肝勻漿脂質過氧化的抑制作用卻表現出較好的效果,對小鼠肝勻漿自發(fā)性脂質氧化產生MDA的IC50為20.50 mg/mL,對Fe2+-H2O2誘導小鼠肝勻漿脂質氧化產生MDA的IC50為9.37 mg/mL??傮w上說海地瓜總皂苷的主要功能并不是用在抗氧化上。
   (6)以昆明種小鼠進行動物實驗,研究海地瓜總皂苷對小鼠的抗疲勞、耐缺氧、抗

10、抑郁作用。得出結果為:中、高劑量組(160、320 mg·d-1·kg-1)具有降低小鼠體重,顯著延長小鼠負重游泳時間的作用;高劑量組能夠有效增加無氧呼吸時對能量物質的動員,增加血乳酸量;中、高劑量在小鼠運動恢復階段清除乳酸的速度明顯較快;海地瓜皂苷不能有效減低血尿素的生成;中、高劑量組皂苷不能增加肝糖原儲備量,反而有降低的效果,高劑量組能增加肌糖原的儲備量;高劑量組同時能夠有效延緩小鼠缺氧窒息時間,有效減少小鼠游泳不動時間;中、高劑量

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