苜蓿皂苷的提取純化與生物活性評價(jià).pdf

1、苜蓿皂苷是苜蓿屬植物中含有的一類重要的生物活性物質(zhì)，近年的研究表明，苜蓿皂苷具有顯著的降血脂和抗動(dòng)脈粥樣硬化等生理功能，具有很高的藥用價(jià)值和開發(fā)前景。因此，本研究以紫花苜蓿為原料，對其提取純化及生物活性進(jìn)行了研究，為苜蓿資源的進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。 本研究的主要試驗(yàn)內(nèi)容和結(jié)果如下：以比色法作為測定苜蓿總皂苷含量的方法，齊墩果酸(OleanolicAcid，OA)為對照品，篩選出香草醛-高氯酸作為顯色體系，經(jīng)紫外掃描，得其最大吸

2、收波長為560nm，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y=0.1453x-0.0071，相關(guān)系數(shù)R2=0.9993，其精密度試驗(yàn)的RSD=0.42％，加標(biāo)回收率為98.3％，其RSD=3.88％，該方法快捷、精確、重現(xiàn)性良好。 試驗(yàn)通過對熱醇法和超聲波輔助法提取的研究，分別得出了提取的最佳工藝參數(shù)：(1)熱醇提取。在參考文獻(xiàn)中乙醇提取最佳工藝的基礎(chǔ)上，通過L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，得出了熱醇法提取的適宜工藝參數(shù)為：浸提溫度80℃、浸提時(shí)間1.5h、

3、乙醇濃度70％、固液比1:20時(shí)TAS的得率最高，平均為1.472％，RSD(％)=1.58％。(2)超聲波輔助提取。考察了乙醇濃度、超聲時(shí)間、固液比對TAS得率的影響，乙醇濃度70％、超聲時(shí)間30min，固液比1:10，TAS得率為2.025％，RSD(％)=4.19％。對兩種提取方法的提取率進(jìn)行比較，得出超聲波輔助法比熱醇法的提取率高37.57％，超聲波技術(shù)用于TAS的提取是有效可行的。 試驗(yàn)以TAS的靜態(tài)吸附量、洗脫率和精

4、制度為考察指標(biāo)，研究了大孔吸附樹脂富集、純化TAS的吸附性能和洗脫參數(shù)，并確定了影響純化效率不同因素的最佳工藝參數(shù)，得出了最佳的上樣和洗脫條件：篩選出的最適樹脂型號為DM-130型。DM-130型樹脂的最佳吸附條件為：溶液pH值為5，上樣液濃度為8-12mg/mL，上樣液流速為2BV/h；最佳解吸條件為：解吸液流速為2BV/h，解吸液溫度為60℃，色譜柱的徑高比1:8，先用4BV的水以2BV/h流速洗脫后，再以4BV的50％的乙醇溶液以

5、2BV/h的流速洗脫，可較好的分離TAB。 將提取純化出的TAS進(jìn)行生物活性研究時(shí)發(fā)現(xiàn)：(1)通過還原力試驗(yàn)，得出TAS具有清除游離基的活性，且還原力的大小和TAS的濃度呈現(xiàn)線性關(guān)系：(2)TAS具有清除DPPH游離基的作用，不同濃度TAS溶液對DPPH的清除作用不同，也表現(xiàn)出一定的濃度效應(yīng)。 綜上所述，采取超聲波輔助醇法提取，利用大孔吸附樹脂富集純化，這些技術(shù)和方法可以有效提高TAS這一有效成分的提取率和純度；通過對T