苜蓿皂苷引起溶血機(jī)制的探究.pdf

1、本試驗(yàn)主要從體內(nèi)和體外兩個(gè)方面著手探討苜蓿皂苷(Alfalfa saponin,AS)溶血特性。通過(guò)灌胃小白鼠苜蓿皂苷考察攝入皂苷是否會(huì)引起溶血，通過(guò)體外溶血試驗(yàn)探討苜蓿皂苷的溶血機(jī)制。試驗(yàn)如下：
　　試驗(yàn)一 苜蓿皂苷體內(nèi)溶血試驗(yàn)
　　為了探究攝入皂苷是否會(huì)引起血管內(nèi)溶血，選取180只健康小白鼠，按體重和性別隨機(jī)分為6個(gè)處理，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只。將0.0125、0.025、0.05、0.1、0.2g/mL皂苷1

2、mL分別灌胃Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組小鼠，對(duì)照組（CK）灌胃等量的生理鹽水（1mL），試驗(yàn)期為30天。試驗(yàn)表明：(1)灌胃苜蓿皂苷后，血常規(guī)中紅細(xì)胞數(shù)目和紅細(xì)胞壓積均降低且Ⅴ組顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)，平均血紅蛋白濃度均高于對(duì)照組且試驗(yàn)Ⅳ、Ⅴ與對(duì)照組相比差異顯著(P＜0.05)。(2)試驗(yàn)Ⅳ、Ⅴ組血漿游離血紅蛋白含量極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)；試驗(yàn)Ⅳ組網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)％極顯著高于對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ組(P＜0.01)。(3)隨著灌胃

3、劑量的加大紅細(xì)胞出現(xiàn)輕度大小不等，試驗(yàn)Ⅲ組部分紅細(xì)胞中心淡染區(qū)消失，細(xì)胞著色較深，且形態(tài)異常。(4)紅細(xì)胞滲透脆性最大抵抗值則顯著升高(P＜0.05)。(5)骨髓造血系統(tǒng)中紅系增生活躍，粒紅比顯著降低(P＜0.05)。(6)灌胃AS對(duì)實(shí)質(zhì)器官組織結(jié)構(gòu)沒(méi)有影響。
　　試驗(yàn)二 苜蓿皂苷體外溶血試驗(yàn)
　　通過(guò)熒光電子顯微鏡和掃描電鏡觀察AS對(duì)紅細(xì)胞形態(tài)的影響,前者拍攝AS和紅細(xì)胞的作用過(guò)程，后者觀察不同濃度對(duì)細(xì)胞形態(tài)影響的程度。采

4、用分光光度法檢測(cè)AS體外溶血時(shí)Na+－K+ATP酶和Ca2+－Mg2+ATP酶活性，設(shè)計(jì)了與葡萄糖通道、陰離子通道、ATP酶相關(guān)的溶液與阻斷劑三個(gè)方面對(duì)AS溶血影響的主要內(nèi)容。結(jié)果顯示：鏡下AS處理的紅細(xì)胞變形嚴(yán)重，出現(xiàn)大量球形紅細(xì)胞和棘形紅細(xì)胞以及囊泡。溶血時(shí)Na+－K+ATP酶和Ca2+－Mg2+ATP酶活性顯著下降（P＜0.01）。AS體外溶血顯示，10%的高滲液葡萄糖顯著拮抗AS溶血（P＜0.01）；高濃度的葡萄糖通道抑制劑細(xì)胞

5、松弛素B和脫氫表雄酮均能顯著拮抗AS溶血（P＜0.01）；氯離子鹽滲液LiCl和NaCl均顯著抑制AS溶血（P＜0.01），高濃度阻斷劑NPPB和DIDIS顯著促進(jìn)AS溶血（P＜0.01）；鈉離子鹽溶液能不同程度的抑制溶血，高濃度的鉀離子鹽溶液和Na+－K+ATP酶抑制劑毒毛旋花苷K則顯著促進(jìn)溶血（P＜0.01）；MgSO4.7H2O和CaCl2均能顯著抑制AS溶血作用（P＜0.01），華蟾酥毒基有協(xié)同AS溶血的作用，高濃度鈣通道抑制劑