蘆芛皂苷的提取、純化及其溶血活性研究.pdf

1、蘆筍皂苷是一類具有環(huán)戊烷多氫菲母核結(jié)構(gòu)的物質(zhì),其具有多種生物活性,高效的提取工藝和純化工藝可為開發(fā)蘆筍皂苷類藥物和保健品奠定良好的基礎(chǔ)。但蘆筍皂苷屬于甾體皂苷,甾體皂苷通過靜脈注射作為藥物使用時(shí),會(huì)有溶血現(xiàn)象,這一特性大大限制了蘆筍皂苷的應(yīng)用。本文主要研究了蘆筍皂苷含量測(cè)定的方法,提取純化工藝,并通過體外實(shí)驗(yàn)對(duì)其溶血進(jìn)行了評(píng)價(jià),以及初步探討了蘆筍皂苷的結(jié)構(gòu)。通過上述實(shí)驗(yàn),得出以下結(jié)論:
　　 1、建立測(cè)定蘆筍總皂苷含量的分光光度

2、測(cè)法,選用菝葜皂苷元為對(duì)照品,比較硫酸-甲醇法、香草醛-高氯酸-冰醋酸法以及高氯酸法三種不同顯色劑對(duì)蘆筍皂苷反應(yīng)適宜性,選用高氯酸法為蘆筍總皂苷的含量測(cè)定方法。在310nm下,蘆筍總皂苷及菝葜皂苷元均有最大吸收,菝葜皂苷元在72～216μg范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系。此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確,適合于蘆筍總皂苷含量的測(cè)定。
　　 2、采用Box-Behnken設(shè)計(jì)和響應(yīng)面分析法,對(duì)蘆筍總皂苷的超聲輔助提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。以提取溫度、提取時(shí)間及超聲

3、功率為自變量,蘆筍總皂苷得率為響應(yīng)值,研究各自變量及其交互作用對(duì)超聲波輔助提取法提取蘆筍總皂苷得率的影響。結(jié)果表明:最佳工藝條件為乙醇濃度95％、提取溫度71℃、提取時(shí)間23min、超聲波功率70W、提取次數(shù)2次,在此條件下獲得總皂苷的提取率為23.96mg/g。
　　 3、采用靜態(tài)及動(dòng)態(tài)吸附解吸試驗(yàn)優(yōu)選適宜于蘆筍皂苷純化的大孔樹脂并優(yōu)化純化條件。結(jié)果表明:S-8型樹脂對(duì)蘆筍皂苷有較好的吸附和洗脫效果,并具有良好的脫色效果,其最

4、佳純化條件為:上樣濃度1mg/mL,上樣量60ml/g樹脂,用pH=7的75％的乙醇洗脫,洗脫劑用量為10mL/g樹脂。純化后得提取物中蘆筍皂苷的純度可達(dá)50.15％,脫色率為92.23％。
　　 4、本文采用肉眼觀察法和分光光度法兩種方法對(duì)蘆筍皂苷的溶血性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,蘆筍皂苷的溶血性具有劑量依賴性,蘆筍皂苷在濃度低于25μg·mL-1時(shí),溶血率<5％,作為注射用藥不會(huì)引發(fā)溶血現(xiàn)象。
　　 5、本文通過泡沫