野木瓜總皂苷的分離純化及抗氧化活性研究.pdf

1、野木瓜(Starntonia Chinens)屬薔薇科(Rosaceae)木瓜屬(Chaenomeles)植物，是貴州省正安縣的特色資源。野木瓜含多種有機(jī)酸、氨基酸、蛋白質(zhì)、維生素和礦物質(zhì)等元素，并富含三萜皂苷、多糖、黃酮、SOD等活性物質(zhì)，是一種藥食兩用的天然植物，在臨床治療及保健功能上均具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。目前對(duì)野木瓜的研究主要集中在普通保健食品的開發(fā)上，有效成分提取純化和活性方面的系統(tǒng)研究尚未見報(bào)道。本論文通過(guò)對(duì)野木瓜三萜皂苷進(jìn)行

2、分離純化的工藝研究及體外抗氧化活性的試驗(yàn)，建立了野木瓜總皂苷的含量測(cè)定方法，提出了適宜于野木瓜總皂苷提取及純化的最佳工藝條件，并對(duì)其體外抗氧化活性作了初步的探索。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下： 1．野木瓜總皂苷的含量測(cè)定選用齊墩果酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用分光光度法，以5％冰乙酸．香草醛溶液和高氯酸為顯色劑，在545 nm0處測(cè)定吸光度。以齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)計(jì)算得回歸方程Y=0.04667 X+0.0

3、8025(r=0.9994)，方程在4～28μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，以此計(jì)算野木瓜中總皂苷的含量。經(jīng)方法學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在1 h內(nèi)吸收值穩(wěn)定，RSD為0.78％；精密度和重現(xiàn)性良好，RSD分別0.66％和1.41％；平均回收率為102.21％(n=5)，RSD為2.23％。表明本法簡(jiǎn)便靈敏，重現(xiàn)性良好，方法可靠，可作為野木瓜總皂苷的定量方法。 2．野木瓜總皂苷浸提條件的優(yōu)化以乙醇為提取溶劑，采用浸提法來(lái)考察影響野木瓜總皂苷

4、提取率的因素。在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，用正交實(shí)驗(yàn)確定了最佳的提取條件。結(jié)果表明，以75％乙醇為提取溶劑，料液比1：15，提取溫度為70℃，時(shí)間為60 min，pH值為7時(shí)總皂苷的提取率最高。 3．野木瓜總皂苷純化工藝的優(yōu)化采用D<,101>大孔樹脂柱(R15×H200 mm，干樹脂質(zhì)量4.000 g)分離純化野木瓜總皂苷，最佳的吸附參數(shù)是：上樣液濃度8.86 mg/mL，流速1 mL/min，pH5左右，最大進(jìn)樣體積不超過(guò)18 m

5、L。最佳的洗脫條件是：先用100 mL蒸餾水洗去雜質(zhì)，再用100 mL 50％乙醇洗脫野木瓜總皂苷，洗脫流速1.5mL/min，收集50％乙醇洗脫部分。研究結(jié)果表明，未純化前總固物中總皂苷的含量為33.5％，純化后總固物中的野木瓜總皂苷含量為60.3％，精制度達(dá)179.2％，且洗脫率達(dá)80％以上。從精制度、純化率等方面考慮，該工藝適宜于野木瓜總皂苷的分離及純化。 4．野木瓜總皂苷抗氧化活性的初步研究體外抗氧化活性實(shí)驗(yàn)表明，野木瓜