發(fā)根農(nóng)桿菌Ri質(zhì)粒轉(zhuǎn)化西洋參條件的研究.pdf

1、本試驗(yàn)以西洋參幾日齡的實(shí)生苗和三年生根為材料，分別用發(fā)根農(nóng)桿菌(Agrobacteriumrhizogenes)進(jìn)行轉(zhuǎn)化。為提高發(fā)根農(nóng)桿菌對西洋參的轉(zhuǎn)化率，作者從外植體的選擇、發(fā)根農(nóng)桿菌的類型、發(fā)根農(nóng)桿菌菌懸液密度、乙酰丁香酮的有無以及對受體西洋參的預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間和感染時(shí)間的選擇等因素進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。本試驗(yàn)研究了發(fā)根農(nóng)桿菌對西洋參高頻轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化，得到了西洋參毛狀根轉(zhuǎn)化條件的最優(yōu)組合，建立了西洋參毛狀根體系，而且還探討了幾個(gè)

2、化學(xué)因子對西洋參毛狀根生長及人生皂苷含量的調(diào)控。為西洋參毛狀根培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝物奠定了基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下： (1)西洋參毛狀根體系的建立西洋參毛狀根遺傳轉(zhuǎn)化材料之一—西洋參實(shí)生苗。將西洋參開裂種子播種到栽培盤中，遮光培養(yǎng)，出苗率為57﹪，取其1～2周苗齡的幼苗作為誘導(dǎo)毛狀根外植體。 西洋參毛狀根遺傳轉(zhuǎn)化材料之二—西洋參三年生根。發(fā)根農(nóng)桿菌A4、R1601和A4(rolA)菌株28℃、120r/min、黑暗條件下培養(yǎng)，達(dá)到

3、對數(shù)生長期。取其1ml菌液在添加100μmol/LAS的MS液體培養(yǎng)基上再活化6h，以未添加AS的菌液作對照。將菌懸液滴在切好的西洋參三年生根橫切面上，25℃、黑暗條件下培養(yǎng)。 (2)毛狀根鑒定對R1601誘導(dǎo)西洋參帶葉幼莖產(chǎn)生的毛狀根體系進(jìn)行鑒定。所獲得的毛狀根都具有很明顯的形態(tài)學(xué)上特征：白色且具有白色絨毛、失去向地性、多根毛、多分枝、生長快速且無需外源激素。在分子水平上用PCR進(jìn)行鑒定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，R1601菌株的T-DN