脂聯素對窒息新生鼠心肌損傷作用及其機制的研究.pdf

1、目的:
　　1、建立新生鼠窒息模型,觀察窒息后新生鼠血清心肌酶(CK、LDH)變化、心肌組織損傷及心肌細胞凋亡情況。
　　2、探討窒息新生鼠缺氧缺血性心肌損傷過程存在AMPK信號通路的激活。
　　3、研究脂聯素對窒息新生鼠缺氧缺血性心肌損傷的作用與心肌組織AMPK表達的影響,并探討其可能的機制。
　　方法:
　　1、實驗分組:50只7日齡新生SD大鼠按完全隨機法隨機分成5組(每組10只):假手術組、窒息組、

2、APN組、Compound C組、APN+Compound C組。
　　2、新生鼠常壓窒息模型制備及藥物干預:僅假手術組模擬常壓窒息過程,不塞瓶及復氧,其余四組制備常壓窒息模型,APN組及APN+Compound C組在窒息前半小時給予腹腔注射APN120μg/kg,Compound C組與APN+Compound C組在窒息前1小時給予腹腔注射Compound C20mg/kg,假手術組及窒息組分別接受同劑量的生理鹽水。每組分別

3、在復氧2小時后立即取血及心臟組織。
　　3、觀察指標:檢測血清心肌酶CK、LDH水平;HE染色觀察心肌病理形態(tài)學改變;免疫組織化學染色法檢測心肌組織AMPK蛋白表達含量;TUNEL法定性及定量分析心肌細胞凋亡。
　　4、數據分析:采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,實驗數據以均數標準差( xs)表示,采用單因素方差分析(one-wayANOVA),并進行方差齊性檢驗,兩兩比較用SNK-q檢驗,P<0.05表示有統(tǒng)計學意

4、義,P<0.01表示有顯著性差異。
　　結果:
　　1、各組血清心肌酶CK、LDH值比較:與假手術組相比,窒息組CK、LDH值顯著升高(P<0.01);與窒息組相比,APN組心肌酶CK、LDH水平明顯下降(P<0.01),而Compound C組及APN+Compound C組CK、LDH值明顯升高(P<0.01);但APN+Compound C組CK、LDH水平低于Compound C組,且差異顯著(P<0.01)。

5、>　　2、心肌組織病理形態(tài)學改變:假手術組大鼠心肌細胞排列規(guī)則整齊,組織間質無炎性水腫,未見炎性細胞浸潤,細胞質均勻淡染,細胞核清晰可見;窒息組、Compound C組及APN+Compound C組均可見心肌細胞排列紊亂,間質明顯充血水腫,大量炎性細胞浸潤,細胞核不規(guī)則,呈濃縮狀,部分細胞出現壞死,核消失,細胞呈空泡樣。APN組上述改變較前三組明顯減輕,心肌間質充血水腫及細胞壞死不明顯,炎性細胞浸潤少見。
　　3、心肌組織AMP

6、K蛋白表達:與假手術組比較,窒息組AMPK蛋白表達升高,差異顯著(P<0.01);與窒息組比較,APN組AMPK蛋白顯著升高(P<0.01),而Compound C組AMPK蛋白表達下降明顯(P<0.01);與Compound C組相比,APN+Compound C組AMPK蛋白表達升高,且差異明顯(P<0.01)。
　　4、心肌細胞凋亡熒光顯色:在熒光顯微鏡下觀察可見假手術組僅有少量的凋亡細胞熒光顯色,窒息組、Compound

7、C組及APN+Compound C組凋亡細胞明顯增多,APN組凋亡細胞較前三組均減少,但多于假手術組。
　　5、心肌細胞凋亡指數(Apoptotic Index,AI)結果比較:與假手術組相比,窒息組AI水平顯著升高(P<0.01);與窒息組相比,APN組AI水平明顯下降(P<0.01),而Compound C組AI水平明顯升高(P<0.01);與Compound C組相比,APN+Compound C組AI水平明顯降低(P<0.