大黃魚(yú)肌纖維生長(zhǎng)和脂肪沉積規(guī)律以及甲狀腺激素的作用.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以中國(guó)四大海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)魚(yú)類大黃魚(yú)為研究對(duì)象，探討大黃魚(yú)肌纖維發(fā)育和肌肉脂肪沉積的規(guī)律；首次克隆了大黃魚(yú)生長(zhǎng)激素受體(GHR)和甲狀腺激素受體(TRα和TRβ)cDNA的部分序列；在此基礎(chǔ)上研究了這些受體mRNA表達(dá)與肌肉生長(zhǎng)和脂肪沉積之間的關(guān)系；并通過(guò)分析脂肪代謝相關(guān)的生理生化指標(biāo)與成年大黃魚(yú)肌肉脂肪含量之間的關(guān)系，進(jìn)一步探索甲狀腺激素及其受體在大黃魚(yú)肉質(zhì)形成過(guò)程中的作用。 1 肌纖維直徑分布和肌肉脂肪含量的比較 運(yùn)用

2、組織學(xué)方法測(cè)定1齡和2齡大黃魚(yú)軸上肌肌纖維直徑，并分析肌纖維直徑的分布情況，同時(shí)采用乙醚抽提法測(cè)定肌肉脂肪含量。結(jié)果表明：1齡和2齡大黃魚(yú)肌纖維直徑均呈單峰分布。1齡魚(yú)肌纖維直徑主要分布在200-400μm之間，而2齡魚(yú)主要分布在200-500μm之間，并且2齡魚(yú)肌纖維直徑分布的跨度要廣，2齡魚(yú)平均肌纖維直徑顯著大于1齡魚(yú)(p<0.01)。肌肉脂肪含量在兩個(gè)年齡之間沒(méi)有表現(xiàn)出顯著的差異。 2 成年大黃魚(yú)肌肉脂肪含量和脂肪酸組成的

3、分析 運(yùn)用乙醚抽提法測(cè)定2.5齡大黃魚(yú)軸上肌脂肪含量。根據(jù)肌肉脂肪含量高低，分為低脂肪含量組(LF組)和高脂肪含量組(HF組)，運(yùn)用氣相色譜分析兩組肌肉中8種脂肪酸組成。結(jié)果表明：采集的70尾大黃魚(yú)軸上肌脂肪含量分布范圍廣(23.7％．57.9％，干基計(jì)算)且變異很大，服從正態(tài)分布。LF組和HF組脂肪含量差異極顯著(p<0.01)。檢測(cè)的8種脂肪酸中，LF組飽和脂肪酸比例>多不飽和脂肪酸>單不飽和脂肪酸?？傮w而言，HF組飽和脂肪

4、酸顯著高于LF組，而多不飽和脂肪比例顯著低于LF組，其中主要是n-3多不飽和脂肪酸比例的下降，但n-3／n-6沒(méi)有差異。單個(gè)脂肪酸中，HF組DHA和EPA有下降的趨勢(shì)(p=0.06，p=0.07)，棕櫚酸含量有上升的趨勢(shì)(p=0.06)。 3 脂肪代謝相關(guān)生理生化指標(biāo)的測(cè)定 檢測(cè)HF組和LF組血液中游離脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、甲狀腺激素水平及組織中FFA水平、蘋(píng)果酸酶的活性，并進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果表明：HF組

5、血清中游離脂肪酸和甘油三酯水平分別比LF組高出60.7％和28.0％，其中游離脂肪酸水平兩組間差異顯著(p<0.01)。血清中TG和FFA水平呈較強(qiáng)的正相關(guān)(R=0.69，p<0.01)。HF組肝臟中游離脂肪酸含量顯著高于LF組(p<0.01)，軸上肌中游離脂肪酸水平比LF組提高了32.7％，但差異不顯著。血清中T3水平兩組間差異不顯著，但隨著脂肪含量的增加，T<,3>有上升的趨勢(shì)(p=0.09)。蘋(píng)果酸酶的活性在組織間和組間均沒(méi)有顯著

6、性差異。相關(guān)性分析結(jié)果表明軸上肌脂肪含量與肝臟游離脂肪酸含量呈較強(qiáng)的正相關(guān)(R=0.64，p<0.01)，同血液中T<，3>水平呈中等強(qiáng)度正相關(guān)(R=0.44，p<0.05)；血液中T<，3>水平與軸上肌FFA水平呈中等強(qiáng)度的正相關(guān)(R=0.46，p<0.05)。提示甲狀腺激素在肌肉脂肪沉積過(guò)程中有重要作用。4生長(zhǎng)激素和甲狀腺激素受體的克隆與表達(dá)用放射免疫分析法，測(cè)定大黃魚(yú)血液中甲狀腺激素水平。發(fā)現(xiàn)1齡和2齡大黃魚(yú)血清中T<，3>水平?jīng)]

7、有顯著差異，均在14ng/ml左右，而隨著年齡的增長(zhǎng)，血清中T<，4>水平下降了近30％，年齡間差異顯著(p<0.05)。血清中T<，3>/T<，4>值在1齡魚(yú)和2齡魚(yú)之間差異不顯著。運(yùn)用RT-PCR方法克隆GHR以及TRs cDNA的部分序列，并測(cè)定肝臟和肌肉中這些受體mRNA表達(dá)的變化。結(jié)果表明：經(jīng)blast比較，克隆所得到的GHR片段是2型GHR受體，與羅非魚(yú)的同源性為82％，與黑鯛的同源性為83％，與烏頰魚(yú)的同源性為87％，與日

8、本青鳉的同源性為91％。克隆所得到的TRs片段分別是TR的兩個(gè)亞型：TRα和TRβ，與大菱鲆的同源性分別為94％、94％，與雞的同源性為83％、67％，與人的同源性為78％、70％。與1齡魚(yú)相比，2齡魚(yú)肝臟中TRβ和GHR mRNA表達(dá)均顯著下調(diào)(p<0.01)，而TRα mRNA表達(dá)沒(méi)有變化。1齡和2齡魚(yú)肌肉中均沒(méi)有檢測(cè)到GHR的表達(dá)。肌肉中TRs表達(dá)模式與肝臟不同，TRβ mRNA表達(dá)沒(méi)有顯著性變化，而TRα mRNA表達(dá)顯著上調(diào)(

9、p<0.01)。提示2齡大黃魚(yú)生長(zhǎng)速度減緩可能與肝臟中GHR及TRβ表達(dá)下調(diào)有關(guān)，而2齡大黃魚(yú)肌纖維肥大可能主要由肌肉TRα介導(dǎo)。5脂肪代謝相關(guān)功能基因表達(dá)的差異 用相對(duì)定量RT-PCR方法測(cè)定生長(zhǎng)激素受體(GHR)、甲狀腺激素受體(TRs)及肉堿轉(zhuǎn)移酶(CPT)mRNA表達(dá)的變化。結(jié)果表明：HF組和LF組肝臟中CPT和GHR mRNA的表達(dá)沒(méi)有顯著性差異，但HF組GHR mRNA表達(dá)有下降的趨勢(shì)(p=0.06)。肌肉中未檢測(cè)到GHR