PPAR-γ激動劑吡格列酮抑制肝癌細胞生長及其機制的研究.pdf

1、背景與目的：過氧化物酶體增殖物激活受體(Peroxisome Proliferator ActiVed Receptors，PPAR)，是一種配體依賴型核轉錄因子，屬于Ⅱ型核受體超家族成員，PPARs可分為由獨立基因編碼的PPAR-α、PPAR-β及PPAR-γ 3種亞型。PPAR-γ與其特異性藥物性或生理性配體結合活化后，能發(fā)揮調控多種靶基因表達的生物學作用。其中抗糖尿病的噻唑烷二酮類藥物(thiazolidinediones，TZD

2、s)是PPAR-γ高選擇性的藥物性配體。目前的研究顯示，給予TZDs活化PPAR-γ途徑后可抑制多種腫瘤細胞生長并誘導其凋亡，本文觀察了PPAR-γ激動劑吡咯列酮(Pioglitazone)對肝癌細胞SMMC772l的生長抑制作用，及其與細胞凋亡和凋亡調控蛋白Caspase-3、FasL的關系，初步探討PPAR-γ激動劑的抗肝癌作用及其可能機制。 方法： 應用MMT法檢測吡咯列酮不同濃度(1μM、10μM、20μM、50

3、μM、100μM)和不同作用時間(24、48、72、120小時)對肝癌細胞SMMC7721生長的影響；用HE染色和透射電鏡觀察細胞凋亡的形態(tài)學變化；流式細胞儀檢測各組的細胞凋亡率；RT-PCR檢測各組肝癌細胞內PPAR-Y mRNA的表達。用免疫細胞化學法檢測各組細胞內Caspase-3和FasL蛋白的表達。 結果： 1.MTT法檢測顯示：lμM、10μM、20μM、50μM、100μM吡咯列酮對肝癌細胞 SMMC77

4、21均有生長抑制作用(P<0.05)，并呈劑量依賴關系；濃度在20μM 以上時吡咯列酮對肝癌細胞生長抑制作用呈時間依賴關系(P<0.05)。 2.HE染色和透射電鏡檢測顯示：100μM吡咯列酮作用于肝癌細胞24小后， 細胞呈現核固縮，胞膜發(fā)泡等典型凋亡表現。 3.流式細胞儀定量檢測顯示：50μM濃度以上的吡咯列酮可誘導肝癌細胞的凋亡，并呈劑量依賴關系(P

5、C7721表達PPAR-YmRNA，不同濃度吡咯列酮作用的肝癌細胞24小時后，肝癌細胞內PPAR-YmRNA的表達呈下降趨勢，隨吡咯列酮濃度的增加而加劇，但無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。 5.免疫細胞化學方法檢測顯示：不同濃度吡咯列酮作用肝癌細胞24小時后，細胞中FasL蛋白表達無顯著變化(P<0.05)；而Caspase-3蛋白的表達顯著增加，并呈劑量依賴關系(p

6、48小時后，細胞凋亡率與細胞生長抑制率之間無顯著相關性(r=O.639，p=O.361)。 結論： 1．PPAR-Y激動劑吡咯列酮對肝癌細胞SMMC7721具有生長抑制作用，并在一定范圍內呈時間與劑量依賴關系。 2.PPAR-Y激動劑吡咯列酮可誘導肝癌細胞的凋亡，這可能參與了其抑制細胞生長作用；但是，細胞凋亡率與生長抑制率之間無顯著相關性，提示尚有誘導細胞凋亡以外的途徑參與吡咯列酮對肝癌細胞的生長抑制 作用。