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文檔簡介
1、目的:本研究通過在短時(shí)期內(nèi)給予大量酒精灌胃的方法建立急性酒精性肝損傷的動物模型,并同時(shí)給予腹腔內(nèi)注射NF-κB阻斷劑PDTC,探討在PDTC干預(yù)下大鼠急性酒精性肝損傷中NF-κB及COX-2的作用機(jī)制以及對TNF-α表達(dá)的影響。
方法:1、干預(yù)組每天禁食不禁水12小時(shí)后給予濃度為55%酒精,8g/kg.d,一天分2次灌胃,于酒精灌胃第三天起,于酒精灌胃前30分鐘給予 PDTC腹腔注射50mg/kg.d,共1周,模型組于酒精灌胃
2、第三天起,給予相同容積生理鹽水腹腔注射,余操作同干預(yù)組。對照組通過給予相同容積的生理鹽水灌胃及腹腔內(nèi)注射。實(shí)驗(yàn)第1周和第2周末行灌胃后于12小時(shí)后分別處死,并左心室采血分離血清待測生化指標(biāo),采血后立即取肝組織用福爾馬林固定,做病理、免疫組織化學(xué)檢測。
2、利用全自動生化分析儀檢測血清ALT和AST值,肝臟組織常規(guī)做石蠟包埋,并且切片行 HE染色和免疫組化染色(SABC法),并且密切觀察肝臟組織病理變化和NF-kB、TNF-α以
3、及COX-2的表達(dá)和分布。
結(jié)果:1.大鼠血清中ALT、AST值的比較:于實(shí)驗(yàn)第1周和第2周,模型組與對照組以及干預(yù)組與模型組比較血清中ALT和AST值均明顯有變化;具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);在模型組第1周與第2周比較中可看出血清ALT和AST值均明顯升高,AST/ALT比值>2;具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
2.病理學(xué)檢查:HE染色結(jié)果:實(shí)驗(yàn)第1周和第2周,模型組與對照組相比較而言,肝臟細(xì)胞腫脹明顯,可見
4、到大小不等的脂肪空泡,有些部分還可見到灶壯壞死,炎癥細(xì)胞浸潤,隨造模時(shí)間延長模型組病變加重。PDTC干預(yù)組較模型組肝細(xì)胞脂肪變性以及炎癥細(xì)胞浸潤較輕。
3.免疫組化染色結(jié)果(1)NF-κB、COX-2、TNF-α陽性細(xì)胞都主要分布在肝中央靜脈周圍。實(shí)驗(yàn)第1周和第2周,模型組中NF-κB、COX-2、TNF-α的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于對照組;均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);干預(yù)組與模型組比較而言表達(dá)有明顯降低;均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<
5、0.05)。模型組第2周較第1周表達(dá)增高;均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(2)肝組織中COX-2的表達(dá)與NF-κB表達(dá)呈正相關(guān)(Spearman等級相關(guān)r=0.435,P<0.05)。(3)肝組織中NF-κB的表達(dá)與TNF-α表達(dá)呈正相關(guān)(Spearman等級相關(guān)r=0.336,P<0.05)。(4)肝組織中COX-2的表達(dá)與TNF-α表達(dá)呈正相關(guān)(Spearman等級相關(guān)r=0.702,P<0.01)。
結(jié)論:1、PDTC
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