實施乙型肝炎疫苗免疫20年后中國東南部海島地區(qū)乙肝血清和分子流行病學研究.pdf

1、本課題共分為兩個部分:
　　第一部分海島地區(qū)乙型病毒性肝炎血清流行病學研究。
　　目的:
　　通過乙型病毒性肝炎血清流行病學調查，了解乙型肝炎疫苗免疫計劃實施20年后，浙江省海島全年齡層人群乙型肝炎病毒(HBV)的流行現狀和影響因素，對海島地區(qū)的乙肝防治效果進行評價。本研究為免疫時代海島乙肝血清流行病學最新調查結果，對于評價乙肝防治特別是疫苗接種效果，及時調整乙肝免疫和控制策略，有效指導浙江省乙肝防治“十二五”規(guī)劃目標

2、均具有十分重要的理論和實踐意義。
　　方法:
　　(1)抽樣方法:采用多階段分層隨機整群抽樣的方法，將浙江省舟山和玉環(huán)兩個海島上的常住居民作為研究總體。首先，根據經濟水平，將每個地區(qū)所有鄉(xiāng)鎮(zhèn)/街道分為高、中、低三層。每層隨機抽取1個鄉(xiāng)鎮(zhèn)/街道，其次，在每個鄉(xiāng)鎮(zhèn)/街道按照經濟水平，隨機抽取3個自然村/社區(qū)。共抽取6個鄉(xiāng)鎮(zhèn)/街道，18個自然村/社區(qū)，共調查15878人。
　　(2)調查方法:對每個調查對象按統一調查表進行詢

3、問調查，同時采集靜脈血，分離血清，低溫保存，檢測相關指標。
　　(3)檢測方法:用酶聯免疫法(ELISA)檢測乙肝病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝病毒表面抗體(Anti-HBs)和乙肝病毒核心抗體(Anti-HBc)。檢測在杭州艾迪康生物檢測有限公司進行。使用艾康生物技術（杭州）有限公司的ELISA試劑，檢測儀器為日本BIO-RAD公司生產的680型酶標分析儀。同時采用IFCC速率法，對每個對象進行丙氨酸氨基轉移酶(ALT)檢測，

4、采用美國貝克曼CX7全自動生化分析儀，試劑盒購于北京利德曼生化股份有限公司。對表面抗原陽性的≥30歲的人群以社區(qū)為單位進行肝癌的初步篩選，甲胎蛋白(AFP)檢測采用ELISA法，試劑盒購自鄭州博賽生物技術股份有限公司，若AFP陽性的患者再行肝臟B超檢查，肝臟彩超檢查由各個社區(qū)衛(wèi)生服務中心放射科的醫(yī)生進行。
　　(4)統計方法:應用WHO推薦的資料統計軟件SPSS13.0進行統計分析。統計方法采用卡方檢驗，檢驗水準為雙側α=0.05

5、。p＜0.01被認為具有顯著性差異。
　　結果:
　　在玉環(huán)和舟山兩個海島地區(qū)14997個有效常住被檢樣本中，共有1763個樣本被檢測出HBsAg陽性，標化后陽性率為10.4％;總體的Anti-HBc陽性率標化后為33.1％。調查人群男性HBsAg陽性率、Anti-HBs、Anti-HBc陽性率分別為13.51％、56.9％、39.3％。調查人群女性HBsAg陽性率、Anti-HBs陽性率、Anti-HBc陽性率分別為10.

6、6％、57.0％、40.2％。ALT陽性率為8.2％，其中男、女陽性率分別為12.0％，5.8％。年齡大于30歲并且HBsAg陽性者中，ALT陽性率為0.6％。海島地區(qū)之間，海島地區(qū)與其他地區(qū)之間的乙肝流行率均存在顯著性差異。
　　結論:
　　對比1979年，1992年和2006年開展的全國范圍的三次病毒性肝炎血清流行病學調查，我國海島地區(qū)的HBsAg攜帶率呈逐年下降的趨勢，但是下降速度遠不及內陸其他地區(qū)。我們的研究顯示，浙

7、江省海島地區(qū)目前仍為HBV高流行地區(qū)。實施乙型肝炎疫苗免疫20年來，海島地區(qū)兒童HBV流行強度顯著低于青年人和成人，且人群Anti-HBs流行率已達到較高水平，但是不同地區(qū)、不同海島間，不同性別仍存在顯著差異。我們的研究還發(fā)現，海島地區(qū)肝癌潛在發(fā)生率相對較高。政府應該更加關注海島上活躍的流動人口，并采取擴大免疫人群等防治措施來控制乙肝流行。
　　第二部分乙肝感染者的血清分子流行病學研究與相關性分析。
　　目的
　　通過

8、乙型病毒性肝炎血清流行病學調查，了解乙型肝炎疫苗免疫計劃實施20年后，浙江省乙肝感染者的血清學標志物流行情況，并對海島地區(qū)篩查出的乙肝感染者對照平原地區(qū)的乙肝感染者做進一步的分層研究（進一步檢測乙肝三系定量，HBV-DNA，ALT，AFP，B超），了解不同地域背景下e抗原流行現狀和影響因素，并開展血清學標志物與HBV-DNA和ALT之間的相關性研究。以取得最新的數據指導該群體的治療和預后研究。
　　方法
　　(1)抽樣方法:

9、
　　采用多階段分層隨機整群抽樣的方法。首先，根據浙江省的兩大主要地貌（平原和海島）選擇紹興縣和玉環(huán)縣，每個地區(qū)根據經濟水平，將所有鄉(xiāng)鎮(zhèn)/街道分為高、中、低三層。每層隨機抽取1個鄉(xiāng)鎮(zhèn)/街道，其次，在每個鄉(xiāng)鎮(zhèn)/街道再根據經濟水平，隨機抽取3個自然村/社區(qū)。共抽取6個鄉(xiāng)鎮(zhèn)/街道，18個自然村/社區(qū)，我們對這18個社區(qū)的居民開展乙肝HBsAg檢測，篩查出的HBsAg陽性的乙肝感染者作為我們的實驗人群，共獲有效調查對象8439人。

10、　　(2)調查方法:
　　問卷調查采用集中與入戶相結合的調查方法，由經專業(yè)培訓的調查員按照統一調查問卷，對每個參與者進行面對面的調查，同時采集靜脈血，分離血清，低溫保存，送檢相關指標。
　　(3)檢測方法:
　　采用熒光定量PCR法，實時、動態(tài)監(jiān)測HBV-DNA載量。檢測在通過衛(wèi)生部PCR實驗室認證的基因診斷實驗室中進行，使用國產杭州博日科技有限公司提供的FO-33A型PCR擴增儀，試劑購自艾康生物技術（杭州）有限公司

11、。同時，用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定血清學標志物，選用杭州艾康生物科技公司生產的酶聯免疫吸附試驗試劑盒。操作嚴格按照試劑盒說明書，用酶標儀(MULTISKAN MK3)讀取和記錄結果。此外，采用美國貝克曼CX7全自動生化分析儀檢測ALT，試劑盒購于北京利德曼生化股份有限公司，操作按試劑盒提供的標準來判斷結果。
　　(4)統計方法:
　　采用EpiData3.1軟件建立調查數據庫，嚴格按照雙錄入的要求統一錄入，應用WHO

12、推薦的資料統計軟件SPSS13.0進行統計分析。統計方法采用卡方檢驗，檢驗水準為雙側α=0.05。p＜0.01被認為具有顯著性差異。
　　結果
　　調查對象為HBsAg陽性的感染者，40-49歲的人群的比例達到最高，為33.2％;乙肝感染者HBeAg陽性率為18.5％，其中＜20歲和＞70歲人群HBeAg陽性率分別為60％和9.2％;男、女性HBeAg陽性率分別為21.9％、14.7％，兩者有顯著性差異;玉環(huán)、紹興地區(qū)的HB

13、eAg陽性率分別為為21.9％、12.9％，兩者有顯著性差異;HBeAg陽性的人中HBV-DNA陽性率為91.0％，HBeAg陰性的人中HBV-DNA陽性率為45.4％，有顯著性差異;在HBV-DNA小于103，103～105，105～107，大于107的人群中HBeAg陽性率分別為3.6％，6.0％，41.1％，94.0％，不同水平的HBV-DNA的人群中HBeAg陽性率有很大的差異;對HBV-DNA和HBeAg定量進行Spearma

14、n秩相關分析，發(fā)現二者有一定的線性關系(p＜0.01)，但是相關性較弱(r=0.394＜0.4)，對HBeAg陽性患者的HBV-DNA和HBeAg定量進行Spearman秩相關分析，發(fā)現二者有一定的線性關系(p＜0.01)，并且正相關性強(r=0.777＞0.7);HBV-DNA陽性率在HBeAg陽性并且ALT升高的人群中為95.4％，在HBeAg陽性但ALT正常的人群中為86.4％，兩組間有顯著的差異(p＜0.01)。HBV-DNA陽

15、性率在HBeAg陰性并且ALT升高的人群中為59.6％，在HBeAg陰性但ALT正常的人群中為41.5％，兩組間也有顯著的差異(p＜0.01)。
　　結論
　　與1992年浙江省病毒性肝炎流行病學調查結果相比，海島地區(qū)的乙肝感染者高發(fā)人群的年齡已從1992年報道的0-9歲和30-39歲推遲到40-49歲，乙肝e抗原在感染者中的流行率與年齡、性別、地域均有重要關系，研究顯示HBV-DNA和HBeAg定量呈一定的線性關系，在HB