乙肝疫苗使用20年后山東省乙型病毒性肝炎血清和分子流行病學(xué)研究.pdf

1、背景：HepB的長(zhǎng)期、廣泛使用可能對(duì)人群HBV的流行強(qiáng)度和流行特征產(chǎn)生影響。為了解HepB接種20年后山東省HBV血清流行病學(xué)和分子流行病學(xué)現(xiàn)狀及特征，于2006年9月開(kāi)展本研究。
　　 研究目的：了解HepB使用20年后山東省社區(qū)人群HBV血清學(xué)指標(biāo)流行率、分布特征、感染模式構(gòu)成以及青少和成人HBV感染的主要危險(xiǎn)因素；與新生兒普種HepB初期比較，探討山東省乙肝流行病學(xué)特征的變化趨勢(shì)，對(duì)防治效果進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。了解山東省社區(qū)人群

2、中HBV基因型、血清學(xué)亞型、HBV S基因變異株和HBV隱匿性感染的流行狀況、分布特點(diǎn)以及病毒株的分子生物學(xué)特點(diǎn)，為完善乙肝控制策略提供參考。
　　 第一部分乙型病毒性肝炎血清流行病學(xué)研究
　　 材料與方法：根據(jù)人群HepB免疫策略調(diào)整情況，將研究對(duì)象分為新生兒普種HepB前出生、新生兒HepB自費(fèi)接種時(shí)期出生和HepB計(jì)劃免疫時(shí)期出生3個(gè)年齡組，分別計(jì)算樣本量；通過(guò)多階段隨機(jī)抽樣在山東省12個(gè)縣隨機(jī)抽取1～59歲調(diào)查對(duì)

3、象7601人。對(duì)所有調(diào)查對(duì)象進(jìn)行問(wèn)卷調(diào)查和血標(biāo)本采集；使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法，檢測(cè)調(diào)查對(duì)象血清HBsAg、乙肝病毒表面抗體、乙肝病毒核心抗體，HBsAg陽(yáng)性者進(jìn)一步檢測(cè)乙肝病毒e抗原和乙肝病毒e抗體。
　　 結(jié)果與分析：
　　 (1)人群HepB接種情況。山東省1～59歲人群HepB全程接種率為27.07％，1～4歲人群HepB全程接種率顯著高于5～14歲和15～59歲人群；10～14歲人群HepB全程接種率顯著低于1

4、0歲以下各年齡組。全省1～14歲人群首針HepB時(shí)接種率為65.41％；1歲組HepB1及時(shí)接種率顯著高于8歲以上各年齡組，城市地區(qū)HepB1及時(shí)接種率顯著高于農(nóng)村地區(qū)；在家出生者顯著低于在鄉(xiāng)鎮(zhèn)級(jí)和縣級(jí)以上醫(yī)院出生者。
　　 (2)HBV血清學(xué)指標(biāo)流行率和分布特征。全省1～59歲人群HBsAg流行率為3.39％，15～59歲人群HBsAg流行率顯著高于1～4歲和5～14歲人群；東、中、西部和城鄉(xiāng)之間，以及不同性別人群之間HBsA

5、g流行率無(wú)顯著差異；與新生兒普及HepB初期相比，1～59歲人群HBsAg流行率下降47.03％，而1～4歲和5～14歲兒童分別下降88.38％和80.95％。全省1～59歲人群Anti-HBs流行率為44.96％，15～59歲人群Anti-HBs流行率顯著低于1～4歲和5～14歲人群；不同地區(qū)和不同性別人群Anti-HBs流行率無(wú)顯著差別；與新生兒普及HepB初期相比，1～59歲人群Anti-HBs流行率上升99.82％，1～4歲和5

6、～14歲兒童分別上升2.97和2.44倍。全省1～59歲人群HBV流行率為24.26％，15～59歲人群HBV流行率顯著高于1～4歲和5～14歲人群；城市地區(qū)HBV流行率顯著高于農(nóng)村地區(qū)；與新生兒普及HepB初期相比，全人群HBV流行率下降51.48％，1,4歲和5～14歲兒童分別下降94.95％和88.83％。全省1～59歲人群中HBV易感率為48.25％，其中15～59歲人群HBV易感率顯著高于1～4歲和5～14歲人群；農(nóng)村地區(qū)人群

7、HBV易感率顯著高于城市地區(qū)。
　　 (3)不同HepB免疫史人群HBV流行率。有HepB免疫史人群Anti-HBs流行率顯著高于無(wú)免疫史和免疫史不詳人群，HBV流行率顯著低于無(wú)免疫史和免疫史不詳人群；未發(fā)現(xiàn)不同HepB免疫史人群HBsAg流行率存在顯著差別。在嬰兒期完成3劑次HepB的1～14歲人群中，10～14歲組人群HBV流行率顯著高于10歲以下人群。
　　 (4)HBV血清學(xué)指標(biāo)檢出模式。調(diào)查對(duì)象共檢出10種HB

8、V血清學(xué)指標(biāo)組合模式，其中第8種感染模式檢出率最高，占調(diào)查對(duì)象的43.69％；第10種感染模式次之，占調(diào)查對(duì)象的37.68％；不同年齡、HepB免疫史人群HBV血清學(xué)感染模式不同。育齡期婦女中共檢出9種感染模式，其中第10種模式所占比例最高，為51.38％；其次為第7種和第8種模式，分別占22.34％和18.07％，以上3種模式合計(jì)占調(diào)查育齡期婦女的91.79％；第4種和第6種占調(diào)查育齡期婦女的1.58％。
　　 (5)青少年及

9、成人HBV感染危險(xiǎn)因素分析。15～59歲人群HBV感染的主要危險(xiǎn)因素按照OR值大小依次為：長(zhǎng)期一起生活的人HBsAg陽(yáng)性、年齡＞30歲、有針灸史、男性和乙肝疫苗接種史(為保護(hù)因素)其OR值分別為2.00，1.57，1.31，1.20，0.78；其人群歸因危險(xiǎn)百分比分別為2.01％、30.27％、2.43％，7.70％和6.48％。
　　 結(jié)論：山東省目前仍為乙肝中度流行區(qū)，青少年和成人中HBV流行強(qiáng)度顯著高于兒童，不同地區(qū)間流行

10、差異依然存在。與新生兒普種HepB初期相比，山東省HBV流行強(qiáng)度減弱，兒童時(shí)期流行高峰消失；人群特別是兒童HBV免疫水平明顯提高，山東省實(shí)施以“新生兒HepB接種”為主的乙肝控制策略取得了顯著成效。目前山東省社區(qū)人群特別是成人中仍有大量HBV易感人群，應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)乙肝控制工作。
　　 創(chuàng)新點(diǎn)：首次對(duì)山東省HepB使用20年后乙肝血清學(xué)流行狀況開(kāi)展全省范圍大樣本研究。研究?jī)?nèi)容系統(tǒng)全面，設(shè)計(jì)實(shí)施科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)，分析方法具有創(chuàng)新，研究結(jié)論翔

11、實(shí)可靠，為進(jìn)一步加強(qiáng)山東省乙肝控制工作提供了科學(xué)的依據(jù)。
　　 第二部分乙型病毒性肝炎分子流行病學(xué)研究
　　 材料與方法：從本研究第一部分乙肝血清學(xué)研究保留的HBsAg陽(yáng)性血清標(biāo)本中提取總核酸，采取巢氏聚合酶鏈反應(yīng)方法擴(kuò)增HBV S基因區(qū)，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行雙向測(cè)序；用BioEdit Sequence Alignment Editor software5.0.9軟件進(jìn)行核苷酸序列排列；用MEGA3.1軟件按照鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)

12、生樹(shù)，在進(jìn)化樹(shù)上靠近的標(biāo)準(zhǔn)株基因型即為該標(biāo)本病毒株的基因型。使用MEGA3.1軟件將核苷酸序列翻譯成氨基酸聯(lián)排序列并進(jìn)行序列比較，根據(jù)S基因中122位、160位、127位、134位、159位、177位和178位氨基酸種類確定HBV血清學(xué)亞型，通過(guò)氨基酸序列比較確定S基因變異位點(diǎn)。計(jì)算不同地區(qū)和人群各HBV基因型和血清型的構(gòu)成比；分析HBV S基因變異株變異位點(diǎn)、變異形式和檢出率；利用X2檢驗(yàn)或Fisher's精確概率法，對(duì)不同地區(qū)、不同

13、年齡、性別、HepB免疫史和血清學(xué)感染模式人群“a”抗原決定簇變異株檢出率的差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)。按照系統(tǒng)抽樣方法，從HBV血清學(xué)研究保留的HBsAg陰性血清標(biāo)本中隨機(jī)抽取485份，提取總DNA，使用Nested-PCR方法擴(kuò)增HBV S基因和C基因，兩次擴(kuò)增兩基因均為陽(yáng)性者確定為OBI；利用以上相同方法確定OBI病毒株的基因型、血清型和S基因、C基因變異情況；計(jì)算不同地區(qū)、不同年齡、性別和血清學(xué)感染模式人群OBI檢出率，利用X2檢驗(yàn)或F

14、isher'S精確概率法對(duì)OBI檢出率差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果與分析：
　　 (1)基因型和血清型分布。對(duì)102份HBsAg陽(yáng)性血清標(biāo)本進(jìn)行了基因型、血清學(xué)亞型和HBV S基因變異的檢測(cè)。檢出B型和C型兩種基因型，其中99.02％為C基因型且全部為C2亞型，僅1株為B基因型B2亞型；檢出adrq+、adw2和ayr3種血清型，其中adrq+型占96.08％，adw2型占2.94％，ayr型占0.98％(1/102

15、)；3株adw2血清型和1株ayr血清型毒株均來(lái)自山東省中部地區(qū)。
　　 (2)S基因變異株流行情況。102株HBV中共檢出15株“a”抗原決定簇變異株病毒，變異株檢出率為14.70％；檢出11個(gè)“a”抗原決定簇aa位點(diǎn)的13種突變形式，其中9種突變形式既往有文獻(xiàn)報(bào)道，包括II26S、II26N、Pl27T、Q129L、G130R、M133T、F134S、P142S和G145R；4種突變形式既往未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，包括P135S、P1

16、35L、C137L和S143T；15株“a”抗原決定簇變異病毒株除4株發(fā)生I126S變異，各有2株發(fā)生P127T變異和G145R變異外，其余變異形式均僅在1株病毒中檢出；不同地區(qū)和不同年齡、性別、HepB免疫史人群間“a”抗原決定簇變異株檢出率均無(wú)顯著性差異。102株病毒中，43.14％被檢測(cè)出前S區(qū)變異，21.57％發(fā)生在前S1區(qū)，15.69％發(fā)生在前S2區(qū)，5.88％同時(shí)發(fā)生在前S1和前S2區(qū)；尤以前S1區(qū)的前端突變較為集中。

17、>　　 (3)隱匿性乙肝病毒感染檢出率及分布情況。485份HBsAg陰性標(biāo)本中4份檢出OBI，檢出率為0.82％；不同HBV血清學(xué)指標(biāo)人群中OBI的檢出率有顯著差別。OBI毒株均為C基因型、adrq+血清學(xué)亞型；2例出現(xiàn)“a”抗原決定簇變異，2例出現(xiàn)“a”抗原決定簇以外突變。
　　 結(jié)論：山東省社區(qū)人群中HBV以C型基因、adrq+血清型為主；少量的adw2和ayr血清型主要集中在中部地區(qū)；社區(qū)人群中HBV S基因變異株的發(fā)生

18、率較低，變異位點(diǎn)比較分散，野毒株仍是優(yōu)勢(shì)毒株；aal26點(diǎn)是HBV“a”抗原決定簇最常見(jiàn)的變異位點(diǎn)。山東省社區(qū)人群中OBI檢出率較低；其檢出率與HBV血清學(xué)感染指標(biāo)有關(guān)。
　　 創(chuàng)新點(diǎn)：本研究首次從無(wú)癥狀HBV攜帶者中證實(shí)C基因型和adrq+血清型在山東省HBV流行的優(yōu)勢(shì)地位。在國(guó)內(nèi)首次從有代表性的社區(qū)人群中對(duì)s基因變異株特別是“a”抗原決定簇變異株的流行率、分布特征和分子生物學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)了4種新的“a”抗原決定簇變異形