Survivin基因的克隆與表達(dá)及其反義核酸對人喉癌細(xì)胞系的生長抑制作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:克隆survivin基因、原核表達(dá)并鑒定;探討survivin基因反義核酸(AS-ODN)對人喉癌細(xì)胞系的生長抑制作用.方法:(1)從培養(yǎng)的人喉癌Hep-2細(xì)胞中提取總RNA,經(jīng)RT-PCR獲得survivin基因;將該基因克隆到pGEM-T-Easy載體中,進(jìn)行測序鑒定;將測序正確的survivin基因亞克隆到pRSET表達(dá)載體中,構(gòu)建survivin表達(dá)載體pRSET-survivin,經(jīng)限制性酶切鑒定、篩選,將獲得的正確的表

2、達(dá)載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌,以IPTG誘導(dǎo)表達(dá)4~5h,收集菌體做SDS-PAGE分析,鑒定survivin蛋白的表達(dá).(2)以高表達(dá)survivin基因的人喉癌細(xì)胞系Hep-2為靶細(xì)胞、反義survivin(AS-ODN)為阻斷劑,通過MTT試驗觀察AS-ODN對喉癌細(xì)胞的生長抑制作用,RT-PCR分析survivin基因反義核酸(AS-ODN)對survivin基因表達(dá)的影響.結(jié)論:(1)Survivin基因的克隆和表達(dá)均獲得了成功,為

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