腫瘤壞死因子β和增殖誘導配體基因多態(tài)性與類風濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)性研究.pdf

1、類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種常見的慢性自身免疫炎癥性疾病，我國發(fā)病率約為0.33％。RA的發(fā)病有明顯的性別傾向，女性的發(fā)病率約為男性的3倍。RA患者的滑膜細胞、單核／巨噬細胞及淋巴細胞可產(chǎn)生大量的細胞因子，這些細胞因子形成復雜的網(wǎng)絡，介導了炎癥的發(fā)展，在RA的發(fā)病中起重要的作用。國內(nèi)外大量的研究顯示白細胞介素(IL)1、IL-8、IL-15和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)是RA中的炎癥因子。本研究中的腫瘤壞死因子-β(TNF-β)及增殖

2、誘導配體(APRIL)也是參與RA的重要炎癥因子。TNF-β的功能與TNF-α相似，它能誘導成纖維細胞合成IL-1，在RA中發(fā)揮炎癥效應。RA實驗小鼠的滑膜液中APRIL大量的表達，用APRIL的受體跨膜激活劑和親環(huán)素配體(TACI)阻斷劑-TACI-Ig能抑制RA鼠的炎癥發(fā)展。本實驗所研究的基因多態(tài)性是指存在TNF-β和APRIL基因上由單個核苷酸突變所引起的多態(tài)性。研究顯示TNF-β和APRIL的基因中存在很多單核苷酸多態(tài)性(SNP

3、)位點，但只有位于TNF-β轉(zhuǎn)錄肩始位點+252位G→A(TNF-β+252位為G的等位基因在文中表示為TNF-β<'-252G>，在表中用G表示；TNF-β+252由G突變?yōu)锳的等位基因在文中表示為TNF-β<'+252A>，在表中用A表示)和APRIL第一外顯子67位密碼子突變使甘氨酸(G)變?yōu)榫彼?R)(APRIL第67位密碼子含G的等位基因在文中表示為APRIL<'67G>，在表中用G表示；APRIL第67位密碼子由G突變?yōu)锳

4、的等位基因在文中表示為APRIL<'67A>，在表中用A表示)的SNP能改變其編碼蛋白的表達水平，是功能性位點。研究TNF-β和APRIL基因的SNP與我國廣東地區(qū)漢族人群類風濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)病的關(guān)系，有助于闡明炎癥細胞因子在本地區(qū)RA發(fā)病機制中的作用，可為RA的臨床治療提供實驗室基礎。 目的： 1．檢測RA患者(靜止期、活動期)和健康對照TNF-β和APRIL的血清水平，探討其水平差異能否作為RA活動期的監(jiān)測指標。

5、 2．研究TNF-β<'252>和APRIL <'G67R>這兩個SNP位點的基因和基因型頻率在RA患者組和對照組中的分布，探討其分布的差異及與RA發(fā)病的聯(lián)系。 3．分析具有TNF-β<'+252>等位基因的RA患者的TNF-β血清水平，以及研究攜帶APRIL <'G67R>突變基因的RA患者的APRIL水平，并研究其血清水平與RA的關(guān)系。 材料與方法： 1．采用序列特異性引物-聚合酶鏈反應(PCR-SSP)和限

6、制性片段長度多態(tài)性-聚合酶鏈反應(PCR-RFLP)技術(shù)檢測120例對照和120例RA患者TNF-β<'+252>和APRIL <'G67R>的基因和基因型，并統(tǒng)計其頻率。 2．采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測TNF-β與APRIL的血清學水平。 3．檢測RA相關(guān)的實驗指標，包括：WBC、RBC、HGB、PLT、ESR、RF、ASO、CRP和抗CCP抗體。 結(jié)論： 1．TNF-β和APRIL血清水平

7、可作為RA病情活動情況的監(jiān)測指標之一。 2．TNF-β<'+252A>等位基因與廣東地區(qū)漢族人群RA發(fā)病強相關(guān)，可能是RA的易感基因。具有TNF-β<'+252G>等位基因人群的RA發(fā)病率低，該基因可能與RA的耐受性有關(guān)。 3．具有兩個突變位點的TNF-β<'+252A>/TNF-β<'+252A>基因型的RA患者其血清水平明顯高于只攜帶一個突變位點的TNF-β<'+252G>/TNF-β<'+252A>基因型的患者的血