多巴胺D5受體突變基因F173L在鹽敏感性高血壓及心肌病中的發(fā)病機理.pdf

1、第一部分高鹽飲食對轉(zhuǎn)人多巴胺D5受體突變基因F173L小鼠血壓的影響及機理研究
　　 高血壓是由多基因和多環(huán)境因素相互作用而導致的一種慢性復雜疾病。鹽是高血壓發(fā)生發(fā)展的重要環(huán)境因素。20世紀60年代，Dahl成功培養(yǎng)了鹽敏感性大鼠，為鹽敏感性高血壓的研究提供了新的模型。多巴胺屬于兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)，主要通過與受體結(jié)合對腎臟鈉水代謝起到調(diào)節(jié)作用，進而調(diào)控血壓。在多巴胺受體的五個亞型中，D5受體因為對多巴胺具有較強的親和力和持續(xù)活性

2、，尤其引人注目。前期的研究發(fā)現(xiàn)，與正常的人D5受體基因相比，人多巴胺D5受體突變基因F173L(D5F173L)失去了活化腺苷酸環(huán)化酶的能力。全身表達D5F173L(CMV-D5F173L)基因的轉(zhuǎn)基因小鼠，與正常人D5基因(CMV-hD5WT)轉(zhuǎn)基因小鼠相比，3月齡開始血壓升高，4月齡開始左心室肥厚。為了研究鹽的攝入對多巴胺D5受體基因突變引起高血壓的影響，我們利用已建立的D5F173L轉(zhuǎn)基因小鼠，通過高鹽喂養(yǎng)試驗，對動物血壓、相關(guān)蛋

3、白表達、ROS產(chǎn)量等進行了相關(guān)研究。
　　 方法：
　　 利用已建立的人多巴胺D5受體突變基因F173L(CMV-D5F173L)轉(zhuǎn)基因小鼠，自五月齡始，分為正常飲食，高鹽飲食，高鹽給藥飲食三組，兩周后頸動脈插管測量轉(zhuǎn)基因動物血壓，光澤精法測定其腎臟NADPH氧化酶的活性，WESTERN BLOT測定轉(zhuǎn)基因小鼠腎臟膜蛋白NADPH氧化酶NOX4業(yè)型和AT1受體的表達。
　　 結(jié)果：
　　 高鹽喂養(yǎng)2周后，

4、D5F173L轉(zhuǎn)基因小鼠的血壓明顯增高[平均動脈壓(99.3±2.1)VS(92.2±5.4)mmHg，P＜0.05]，AT1受體拮抗劑坎地沙坦有效降低血壓[平均動脈壓(71.1±7.6)VS(99.3±2.1)mmHg，P＜0.05]。多巴胺D5受體突變基因F173L小鼠腎臟膜蛋白NADPH氧化酶的活性[(383.15±36.09)VS(248.95±27.14)熒光值/60ug/min，P＜0.05]和表達均明顯高于hD5WT轉(zhuǎn)基因

5、小鼠。高鹽喂養(yǎng)顯著增加D5FL173L轉(zhuǎn)基因小鼠腎臟細胞膜蛋白NADPH氧化酶的活性[(541.99±30.67)VS(383.15±36.09)熒光值/60ug/min，P＜0.05]和蛋白的表達。AT1受體拮抗劑坎地沙坦明顯降低了D5FL173L轉(zhuǎn)基因小鼠腎臟細胞膜蛋白NADPH氧化酶的活性[(429.42±46.37)VS(541.99±30.673)熒光值/60ug/min，P＜0.05]。正常飲食情況下，腎臟細胞膜蛋白中AT1

6、受體的表達D5F173L轉(zhuǎn)基因小鼠顯著高于hD5WT轉(zhuǎn)基因小鼠。而高鹽飲食對D5F173L轉(zhuǎn)基因小鼠AT1受體的表達無顯著影響。
　　 結(jié)論：
　　 多巴胺D5受體通過腎臟氧化應激和腎臟血管緊張素系統(tǒng)，參與了鹽敏感性高血壓的調(diào)控。D5F173L轉(zhuǎn)基因小鼠可以作為鹽敏感性高血壓的動物模型，可作為研究原發(fā)性高血壓和鹽敏感性高血壓發(fā)病機理研究和藥物功效性評價的工具。
　　 第二部分氧化應激對心臟特異表達轉(zhuǎn)人D5受體突變

7、基因F173L小鼠心肌肥大的調(diào)節(jié)作用
　　 多巴胺是一種兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)，通過與多巴胺受體結(jié)合調(diào)節(jié)下游信號通路發(fā)揮作用。在多巴胺受體的五個亞型中，D5受體的作用尤其引人注目。利用心臟特異啟動子α-MHC構(gòu)建轉(zhuǎn)基因表達載體，顯微注射法建立心臟特異表達的人多巴胺D5F173L/WT（α-MHC-D5F173L/WT）轉(zhuǎn)基因小鼠自三月齡始出現(xiàn)心肌肥大的表型，但血壓未見升高。氧化應激在心肌病的發(fā)病中起到很重要的作用，我們推測多巴胺D5

8、受體通過調(diào)節(jié)心臟NADPH氧化酶的表達和/或活性參與了心肌肥大的調(diào)控。
　　 方法：
　　 利用已建立的心臟特異表達轉(zhuǎn)人多巴胺D5受體突變基因F173L(α-MHC-D5F173L)小鼠，光澤精法測定其NADPH氧化酶的活性，WESTERN BLOT測定轉(zhuǎn)基因小鼠腎臟膜蛋白NADPH氧化酶NOX2亞型的表達。同時自三月齡始，腹腔注射NADPH氧化酶抑制劑Apocynin兩周，兩周后心動超聲儀檢測轉(zhuǎn)基因小鼠的心臟結(jié)構(gòu)和功能

9、。
　　 結(jié)果：
　　 α-MHC-D5F173L轉(zhuǎn)基兇小鼠NADPH氧化酶的活性和表達均明顯高于α-MHC-D5-hWT轉(zhuǎn)基因小鼠,給藥兩周后，Apocynin對于α-MHC-D5F173L轉(zhuǎn)基因小鼠的心畦功能干預并不明顯。
　　 結(jié)論：
　　 心臟特異表達轉(zhuǎn)人多巴胺D5受體突變基因F173L(α-MHC-D5F173L)小鼠出現(xiàn)心肌肥大、NADPH氧化酶活性增強。多巴胺通過D5受體在心臟可能具有抑制氧