多巴胺D5受體對(duì)腎近曲小管上皮細(xì)胞腎胺酶的影響在高血壓發(fā)生中的作用研究.pdf

1、一、研究背景
　　 高血壓(essential hypertension，EH)及其并發(fā)癥已經(jīng)成為影響人類健康的主要原因之一。交感活性的增高在高血壓的發(fā)病中發(fā)揮了重要作用，其主要原因是過(guò)多的去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)和腎上腺素(epinephrina，E)可以通過(guò)收縮血管引起血管張力升高，還可通過(guò)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激以及促進(jìn)細(xì)胞凋亡等來(lái)影響血壓水平。但是，同屬交感神經(jīng)遞質(zhì)兒茶酚胺的多巴胺(dopamine，DA)

2、則在很多情況下通過(guò)激活多巴胺受體發(fā)揮著與NE、E相反的負(fù)性調(diào)控血壓作用。多巴胺受體為G蛋白偶聯(lián)受體，分為D1類(D1、D5)和D2類(D2、D3、D4)。激活多巴胺受體不僅可以誘導(dǎo)利鈉、利尿及血管舒張，而且可以直接影響交感活性。既往研究證實(shí)，激活交感神經(jīng)節(jié)節(jié)前纖維多巴胺D1類或D2類受體，均可以減少神經(jīng)末梢去甲腎上腺素的釋放。此外，多巴胺D4、D5受體基因敲除小鼠會(huì)出現(xiàn)顯著的交感活性增強(qiáng)，并發(fā)展成為高血壓。由此提示，多巴胺受體的激活會(huì)產(chǎn)

3、生對(duì)交感活性的負(fù)性調(diào)節(jié)作用。
　　 近年來(lái)，交感活性的增強(qiáng)在心血管疾病發(fā)病中的作用已被公認(rèn)。腎胺酶(renalase)是目前發(fā)現(xiàn)的降解循環(huán)系統(tǒng)兒茶酚胺的單胺氧化酶。Renalase由腎臟合成并分泌，它與慢性腎病(Chronic Kindey Disease，CKD)和終末期腎病(End-stage Renal Disease，ESRD)患者高血壓的發(fā)病密切相關(guān)。renalase缺乏會(huì)導(dǎo)致循環(huán)系統(tǒng)中兒茶酚胺的增加和血壓的升高。re

4、nalase的活性和分泌受到兒茶酚胺的調(diào)節(jié)，激活多巴胺受體可以上調(diào)心肌細(xì)胞系H9C2細(xì)胞的renalase的基因轉(zhuǎn)錄。但作腎臟renalase的合成是否受到多巴胺受體的調(diào)節(jié)尚缺乏直接證據(jù)。多巴胺受體發(fā)揮調(diào)控交感活性的作用是否通過(guò)影響腎臟renalase這一途徑完成有待于證實(shí)。其中其主要主用的又是哪一個(gè)多巴胺受體亞型還有待于進(jìn)一步研究。研究證實(shí)，多巴胺D1類受體和renalase均在腎近曲小管上皮細(xì)胞上表達(dá)豐富，由此我們推測(cè)，多巴胺受體通

5、過(guò)影響腎近曲小管上皮細(xì)胞renalase的表達(dá)和活性，進(jìn)一步調(diào)節(jié)交感活性和血壓。
　　 二、研究目的
　　 1、比較WKY大鼠(Wistar-Kyoto rats)和自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneouslyhypertensive rats，SHR)成年大鼠腎組織中renalase的表達(dá)和活性的差異。
　　 2、觀察多巴胺D1類受體激動(dòng)劑對(duì)腎臟近曲小管上皮細(xì)胞renalase的轉(zhuǎn)錄、蛋白表達(dá)及活性的影響。

6、r>　　 3、探索多巴胺D1類受體影響renalase的機(jī)制。
　　 4、比較多巴胺D1類受體調(diào)節(jié)腎近曲小管上皮細(xì)胞(renal proximal tubules，RPTs)的renalase在WKY和SHR的差異。
　　 三、研究方法
　　 1、腎近曲小管上皮株的培養(yǎng)(WKYRPT、SHR-RPT)。
　　 2、利用RT-PCR的方法檢測(cè)多巴胺Di類受體激動(dòng)劑fenoldopam處理后，WKY-RPT

7、和SHR-RPT的renalase基因轉(zhuǎn)錄水平的改變。
　　 3、利用Western-blot方法，檢測(cè)WKY大鼠和SHR的腎臟中renalase表達(dá)的差異；并檢測(cè)多巴胺D1類受體激動(dòng)劑fenoldopam處理后WKY-RPT和SHR-RPT的renalase蛋白表達(dá)變化。
　　 4、利用NADH氧化活性法，檢測(cè)WKY大鼠和SHR腎臟中renalase活性差異；并檢測(cè)fenoldopam處理后WKY-RPT和SHR-RP

8、T的renalase蛋白和分泌活性的變化。
　　 四、研究結(jié)果
　　 1、WKY大鼠相比，SHR腎臟renalase表達(dá)和活性均顯著降低。
　　 2、激活多巴胺Di類受體，fenoldopam可以上調(diào)WKY-RPT的renalase的基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)，并可以上調(diào)其細(xì)胞蛋白中renalase的氧化活性，以及其分泌活性。
　　 3、刺激多巴胺D1類受體，fenoldopam可以下調(diào)SHR-RPT的renal

9、ase蛋白表達(dá)和蛋白活性，該作用均成一定的濃度依賴性。
　　 4、刺激多巴胺D1類受體上調(diào)WKY-RPT的renalase的作用，主要是通過(guò)多巴胺D5受體經(jīng)由蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)這一中間信號(hào)分子完成。
　　 五、結(jié)論
　　 刺激多巴胺D1受體可上調(diào)WKY-RPT的renalase的蛋白表達(dá)、蛋白活性和分泌活性，該作用主要是經(jīng)由Ds受體通過(guò)上調(diào)PKC的活性實(shí)現(xiàn)的。多巴胺Di類受體激