維生素D對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟纖維化的影響.pdf

1、目的：觀察維生素D對(duì)糖尿病腎?。―N）大鼠的腎臟纖維化是否有可逆性治療作用，研究該病理過(guò)程中腎臟纖維化相關(guān)基因隨著病程進(jìn)展的表達(dá)變化以及當(dāng)TGF-β1基因高表達(dá)及干擾時(shí)其他基因隨之出現(xiàn)的變化趨勢(shì)。
　　方法：（1）病毒的制備：通過(guò)PCR獲得人源TGF-β1目的基因，包裝重組的rLv-TGFβ1過(guò)表達(dá)慢病毒以及重組的rLv-TGFβ1-ShRNA干擾慢病毒，濃縮純化后，采用熒光法測(cè)定慢病毒滴度。（2）大鼠的分組及處理：將108只雄性

2、SD大鼠隨機(jī)分為①空白對(duì)照組（n=18）②GFP組n=（n=18）③TGF-β1+維生素D組（過(guò)表達(dá)+VD組；n=18）④TGF-β1+花生油（過(guò)表達(dá)+花生油組；n=18）⑤Sh RNA-TGF-β1+維生素D組（干擾+VD組；n=18）⑥Sh RNA-TGF-β1+花生油組（干擾+花生油組；n=18）將①-⑥組大鼠分別于3、14、37天分批處死（n=6）處死，留取病毒注射側(cè)大鼠腎臟。（3）檢測(cè)的方法：采用HE和Masson染色、電鏡技

3、術(shù)、免疫組織化學(xué)染色及實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)評(píng)價(jià)腎臟纖維化程度和維生素D對(duì)纖維化的影響，并檢測(cè)腎臟纖維化過(guò)程中 TGF-β1在過(guò)表達(dá)及干擾的情況下，CTGF、MCP-1及VDR等相關(guān)基因的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：（1）腎臟組織形態(tài)學(xué)觀察顯示，空白對(duì)照組與GFP組病變程度相似，并且隨著糖尿病腎病模型成模時(shí)間逐漸延長(zhǎng)，腎臟纖維化程度逐步加重。過(guò)表達(dá)+VD組與過(guò)表達(dá)+花生油組相比纖維化程度減輕，干擾+VD組與干擾+花生油組相比纖維化程度減

4、輕。（2）免疫組織化學(xué)檢測(cè)：與腎臟組織形態(tài)學(xué)檢測(cè)相似結(jié)論。（3）RT-PCR：空白對(duì)照組與GFP組基因表達(dá)量相似，在TGF-β1基因高表達(dá)的情況下，MCP-1、CTGF均出現(xiàn)相對(duì)高表達(dá)，在維生素D的干預(yù)下，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，基因表達(dá)出現(xiàn)逐漸降低的趨勢(shì)。在TGF-β1干擾時(shí)，MCP-1、CTGF均出現(xiàn)相對(duì)低表達(dá)，在維生素D的干預(yù)下，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，基因出現(xiàn)逐漸降低的趨勢(shì)。VDR基因在維生素D的干預(yù)下，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，基因出現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)。