化合物二(1-(4-(二甲氨基)苯亞甲基氨基)硫脲)鈀(Ⅱ)的抗腫瘤活性及作用機(jī)制研究.pdf

1、縮氨基硫脲類席夫堿化合物及金屬配合物近年來受到世界各國生物、化學(xué)、醫(yī)藥領(lǐng)域的廣泛關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，這類化合物具有抗菌、抗病毒、抗結(jié)核、抗癌等多方面的生物活性。近幾年來，有關(guān)希夫堿金屬配合物抗腫瘤活性的研究有一定報(bào)道，然而關(guān)于此類化合物的抗腫瘤作用機(jī)制的研究報(bào)道還比較少。因此，研究縮氨基硫脲希夫堿金屬配合物的生物活性及其作用機(jī)制，對(duì)開發(fā)新型高效、低毒的抗癌藥物具有重要意義。
　　 本論文以體外培養(yǎng)的人胃癌細(xì)胞系BGC-823、SGC

2、-7901及裸鼠荷胃癌模型為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，研究兩種縮氨基硫脲希夫堿鈀金屬配合物:二（1-（4-（二甲氨基）苯亞甲基氨基）硫脲）鈀(Ⅱ)(DMABTSPd)與二（1-（4-（二甲氨基）苯亞甲基氨基）-4-苯基縮氨基硫脲）鈀(Ⅱ)(DMABPTSPd)的抗腫瘤生物學(xué)活性，并初步探討其作用機(jī)制，同步采用正常胃粘膜細(xì)胞株GES-1作為參考，檢測目標(biāo)化合物對(duì)正常細(xì)胞的毒副作用。同時(shí)，建立裸鼠皮下移植瘤模型從動(dòng)物水平檢測上述化合物對(duì)腫瘤增殖的作用及體外

3、細(xì)胞中的觀察數(shù)據(jù)。
　　 體外細(xì)胞研究結(jié)果:采用MTT法分別測定兩種細(xì)胞系經(jīng)不同濃度目標(biāo)化合物（DMABTSPd與DMABPTSPd）處理后的細(xì)胞存活率，數(shù)據(jù)表明DMABTSPd對(duì)BGC823和SGC7901細(xì)胞具有明顯的存活抑制作用，它們的存活率與化合物呈劑量-時(shí)間依賴關(guān)系，DMABPTSPd對(duì)BGC823和SGC7901細(xì)胞的存活率沒有影響;采用DAPI染色與AnnexinV/PI雙染試劑盒經(jīng)熒光顯微鏡與流式細(xì)胞儀檢測DMA

4、BTSPd是否具有在體外誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞發(fā)生凋亡的能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DMABTSPd可有效誘導(dǎo)BGC-823和SGC-7901細(xì)胞發(fā)生凋亡，而DMABPTSPd沒有明顯誘導(dǎo)BGC823和SGC7901細(xì)胞凋亡。進(jìn)一步，通過Rho123染色的方法檢測不同濃度目標(biāo)化合物處理24h的BGC823和SGC7901細(xì)胞線粒體跨膜電位的變化，并采用WesternBlot方法檢測與細(xì)胞凋亡相關(guān)的信號(hào)分子的蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示DMABTSPd在體外可有效降

5、低細(xì)胞線粒體跨膜電位、剪切PARP-1、抑制Bcl-2的表達(dá)和促進(jìn)Bid的表達(dá)，DMABPTSPd的加入無明顯作用。同時(shí)觀察到DMABTSPd對(duì)正常人胃粘膜細(xì)胞GES-1基本無不良影響。
　　 體內(nèi)動(dòng)物模型研究結(jié)果:皮下注射體外培養(yǎng)的人胃癌BGC-823細(xì)胞，建立裸鼠皮下移植瘤模型，瘤體皮下注射DMABTSPd與DMABPTSPd，形態(tài)學(xué)技術(shù)測量瘤體重量、大小等;組織學(xué)技術(shù)檢測裸鼠肝臟結(jié)構(gòu)變化、TUNEL試劑盒檢測腫瘤細(xì)胞凋亡變

6、化;免疫組化的方法檢測細(xì)胞增殖標(biāo)志性蛋白Ki-67的表達(dá)水平與凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bid的表達(dá)量。結(jié)果表明，有效劑量的DMABTSPd在裸鼠體內(nèi)可抑制腫瘤增殖并抑制Ki-67的表達(dá)，同時(shí)可以下調(diào)Bcl-2表達(dá)和上調(diào)Bid的表達(dá)，DMABPTSPd對(duì)瘤體無明顯作用。另外，我們也觀察到該化合物對(duì)裸鼠肝臟沒有明顯損傷。
　　 綜上所述，本論文的研究結(jié)果證實(shí)了兩種縮氨基硫脲希夫堿鈀金屬配合物之一的DMABTSPd具有抑制人胃癌細(xì)胞存

7、活增殖及誘導(dǎo)凋亡發(fā)生的能力，并DMABTSPd誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞的凋亡與Bcl-2、Bid介導(dǎo)的線粒體通路有關(guān)。這些結(jié)果不僅在細(xì)胞與動(dòng)物水平證實(shí)縮氨基硫脲類希夫堿及金屬配合物的抗腫瘤活性，并且初步提出該化合物可能通過線粒體途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，在其中Bcl-2與Bid信號(hào)分子發(fā)揮重要作用，從而為DMABTSPd作為基于Bcl-2/Bid分子靶點(diǎn)的抗胃癌藥物開發(fā)提供一定的理論依據(jù)，也為縮氨基硫脲類希夫堿金屬配合物作為先導(dǎo)物進(jìn)一步開發(fā)新型抗腫瘤