丹參酮ⅡA對(duì)于大鼠海水淹溺性肺損傷的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)一：丹參酮IIA對(duì)于大鼠海水淹溺性肺損傷以及肺組織細(xì)胞凋亡的作用及其機(jī)制的研究
　　海水淹溺是事故意外死亡的一個(gè)重要原因。除了因窒息死亡外，其致死的原因主要為急性肺損傷（acutelunginjury，ALI）和急性呼吸窘迫綜合癥（Acuterespiratorydistresssyndrome，ARDS），是各種原因?qū)е路尾垦装Y加重和肺部通透性增加的結(jié)果。近年來(lái)許多研究顯示細(xì)胞凋亡與肺損傷的發(fā)生之間有著密切的聯(lián)系，肺上皮細(xì)胞

2、和微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的增加導(dǎo)致了肺泡血管-上皮屏障通透性改變，直接引起了肺損傷的發(fā)生。丹參酮IIA（TanshinoneIIA，TIIA）是中藥丹參的一種主要活性成分，目前研究表明丹參酮IIA具有抗炎和抗氧化等作用，在抗感染、抗動(dòng)脈粥樣硬化、改善微循環(huán)等方面有著較好的療效和廣泛的應(yīng)用。
　　1.目的：
　　本實(shí)驗(yàn)研究了細(xì)胞凋亡在海水淹溺性急性肺損傷發(fā)病機(jī)制中的意義，探索丹參酮IIA對(duì)于海水淹溺大鼠模型中肺損傷的治療作用以及對(duì)

3、于肺組織細(xì)胞凋亡的影響，探討丹參酮IIA是否通過(guò)調(diào)控Akt和ERK路徑來(lái)抑制細(xì)胞凋亡從而達(dá)到減輕肺損傷的作用。
　　2.方法：
　　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為三組：(1)空白對(duì)照組：不給于海水注入及丹參酮IIA干預(yù)，余處理同其他組；(2)海水組：動(dòng)物麻醉后，行頸正中切口，暴露氣管，用注射器刺入氣管，勻速在4分鐘內(nèi)注入對(duì)應(yīng)量海水(4mL/kg)；(3)丹參酮IIA干預(yù)組：各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物注入海水10分鐘后，于腹腔內(nèi)注入丹參酮IIA(50mg/k

4、g)。各組動(dòng)物在各實(shí)驗(yàn)截點(diǎn)放血處死，取右中肺組織行肺血管伊文思藍(lán)通透性檢測(cè)，右下肺組織切片行組織病理學(xué)和TUNEL檢測(cè)，左肺組織行干濕比檢測(cè)，右上肺組織勻漿行ERK1/2、Akt、Caspase-3、Bcl-2的Westernblotting檢測(cè)。
　　3.結(jié)果：
　　丹參酮IIA可以顯著改善海水淹溺后導(dǎo)致的大鼠肺病理學(xué)改變，減輕PaO2的下降，緩解肺水腫、肺血管的滲漏以及BALF中細(xì)胞的滲出程度。如TUNEL結(jié)果所示，氣管

5、內(nèi)注入海水可導(dǎo)致大鼠肺組織凋亡細(xì)胞數(shù)量的增加，同時(shí)，海水組較空白對(duì)照組凋亡相關(guān)因子Caspase-3增加明顯，而凋亡抑制因子Bcl-2則顯著降低，并且海水注入導(dǎo)致Akt和ERK1/2的活性降低。相比較海水組，丹參酮IIA處理組凋亡細(xì)胞的數(shù)量明顯減少，增加了抗凋亡因子Bcl-2的含量、抑制了肺組織中Caspase-3蛋白含量的上升，同時(shí)上調(diào)了Akt和ERK1/2的活性。
　　4.結(jié)論：
　　細(xì)胞凋亡在海水淹溺性肺損傷的發(fā)病機(jī)制

6、中有著重要的意義，而丹參酮IIA可以改善肺損傷的病理生理?yè)p害以及減輕肺損傷大鼠肺組織水腫和細(xì)胞凋亡程度，這種作用可能部分是通過(guò)調(diào)節(jié)Akt和ERK1/2信號(hào)傳導(dǎo)通路從而減少肺組織細(xì)胞凋亡來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
　　實(shí)驗(yàn)二：丹參酮IIA對(duì)于海水淹溺性肺損傷大鼠肺組織中AQP1、AQP5表達(dá)變化的作用及其機(jī)制的研究
　　海水淹溺后，事故現(xiàn)場(chǎng)因大量海水快速進(jìn)入肺內(nèi)、阻塞呼吸道引起喉頭、氣管痙攣可導(dǎo)致急性窒息死亡，后期病程發(fā)展中肺水腫為一個(gè)突出的

7、臨床表現(xiàn)，并可進(jìn)一步引起ALI和ARDS，因而，在吸收肺內(nèi)海水的同時(shí)減少肺內(nèi)液體的形成、及時(shí)有效的緩解肺水腫的發(fā)生顯得尤為重要。AQPs（Aquaporins）是一類(lèi)可調(diào)節(jié)進(jìn)出細(xì)胞膜水分子的蛋白質(zhì)通道，其中在肺部表達(dá)的AQP1、AQP5在肺泡毛細(xì)血管間水轉(zhuǎn)運(yùn)中發(fā)揮著重要作用。丹參酮IIA作為中藥丹參的一種含量最高的有效成分，可以通過(guò)下調(diào)生長(zhǎng)因子和血管活性物質(zhì)、抑制血小板聚集、抑制交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞等機(jī)制發(fā)揮松弛平滑肌、改善微循環(huán)等作用。

8、r>　　1.目的：
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠海水淹溺性肺損傷的模型，研究AQP1、AQP5在氣管內(nèi)注入海水后肺組織內(nèi)含量的改變，同時(shí)探討丹參酮IIA對(duì)于海水淹溺型肺損傷和對(duì)AQP1、AQP5的作用，了解其是否通過(guò)調(diào)控AQP1、AQP5的表達(dá)來(lái)減輕海水淹溺性肺水腫從而達(dá)到緩解肺損傷的發(fā)生。
　　2.實(shí)驗(yàn)方法：
　　2.1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組及處理同實(shí)驗(yàn)一。各組動(dòng)物均在實(shí)驗(yàn)截點(diǎn)放血處死，取右中肺組織行肺血管伊文思藍(lán)通透性

9、檢測(cè)，右下肺組織切片行組織病理學(xué)及AQP1、AQP5蛋白免疫組化檢測(cè)，左肺組織行干濕比檢測(cè)，右上肺組織勻漿行AQP1、AQP5Westernblotting及RT-PCR分子生物學(xué)檢測(cè)。
　　2.2.細(xì)胞試驗(yàn)：A549細(xì)胞經(jīng)胰酶消化并計(jì)數(shù)后接種于培養(yǎng)皿中，孵育24小時(shí)待所有細(xì)胞貼壁后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組：空白對(duì)照組，海水組（海水濃度25％），25ug/mlTIIA組+海水組，丹參酮IIA處理組在加入海水的同時(shí)加入對(duì)應(yīng)劑量的丹參酮IIA，用

10、培養(yǎng)液補(bǔ)足液體總量為8ml。
　　3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　大體實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)改善血?dú)獾闹笜?biāo)和肺組織病理學(xué)、緩解肺水腫和肺血管滲漏，丹參酮IIA可以減輕海水淹溺性肺損傷。肺組織蛋白的免疫組化、RT-PCR和Westernblotting的數(shù)據(jù)顯示海水注入肺部導(dǎo)致了肺組織中AQP1、AQP5的mRNA和蛋白水平的上調(diào)，mRNA的改變?cè)?h達(dá)到頂峰，AQP1、AQP5蛋白的改變?cè)?-6h達(dá)到頂峰。而丹參酮IIA處理組AQP1、AQP5的

11、表達(dá)較海水組明顯降低，但仍高于空白對(duì)照組。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，同樣顯示海水浸泡后的A549細(xì)胞AQP1、AQP5蛋白表達(dá)明顯增加，而丹參酮IIA可以調(diào)節(jié)AQP1和AQP5蛋白的過(guò)度表達(dá)，從而保護(hù)A549細(xì)胞正常形態(tài)及活性。
　　4.結(jié)論：
　　AQP1、AQP5在大鼠海水淹溺性肺損傷的發(fā)生機(jī)制中有著重要的意義，兩者的過(guò)度表達(dá)可能參與引起海水淹溺性肺水腫的發(fā)生和發(fā)展，而丹參酮IIA可以改善海水淹溺性肺損傷以及減輕肺水腫的程度，下調(diào)A