豬傳染性胃腸炎病毒的分離鑒定及基因7的克隆和表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、傳染性胃腸炎(TransmissibleGastroenteritis，TGE)是一種以嘔吐、嚴(yán)重腹瀉、脫水致仔豬高死亡率為特征的高度接觸性傳染病。豬傳染性胃腸炎病毒(TransmissibleGastroenteritisVirusofSwine，TGEV)屬于冠狀病毒科、冠狀病毒屬。豬對傳染性胃腸炎病毒最為易感。各種年齡的豬都可感染，且感染豬生長緩慢，飼料報(bào)酬率低，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。 本研究從四川省某豬場采集疑似

2、病例的腹瀉糞樣并分離到一株病毒，該病毒經(jīng)過ST細(xì)胞傳代培養(yǎng)盲傳至第二代時(shí)出現(xiàn)病變；樣品正染后在電鏡下的觀察到70nm左右大小的病毒粒子；有機(jī)試劑(氯仿)的敏感性實(shí)驗(yàn)中病毒對氯仿敏感；BUDR對病毒無抑制作用，屬于RNA病毒；病毒的TCID50測定值為10-4.61/50μl，病毒的中和指數(shù)為128.8。初步確定該毒株為豬傳染性胃腸炎，命名為TGEVSC-1株。 參照GenBank中收錄的TGEV基因7的序列設(shè)計(jì)了一對特異性引物，

3、通過RT-PCR擴(kuò)增獲得了SC-1株的相應(yīng)基因片段，大小約為303bp，回收目的片段，經(jīng)PCR鑒定、酶切鑒定及測序，結(jié)果都與預(yù)期相符合。該目的片段的序列已登錄在GenBank上(登錄號為DQ437507)。 對TGEVSC-1基因7的核苷酸序列和推導(dǎo)的氨基酸進(jìn)行生物信息學(xué)比較和分析，結(jié)果表明該毒株與其它毒株的同源性大都在92.4％以上，TGEVSC-1株與美國的PURDUE和中國的TH-98毒株親緣關(guān)系很近，進(jìn)一步確實(shí)了該毒株為