基于表面等離子共振生物傳感器的核酸檢測新技術(shù)研究.pdf

1、核酸是一類最基本的物質(zhì)，在生物體遺傳信息的存儲、復(fù)制和傳遞的過程中起著至關(guān)重要的作用，是生命科研領(lǐng)域的熱點之一。獲取目標核酸的序列、濃度等信息，對基因診斷、基因篩選、檢測基因變異以及新藥開發(fā)等領(lǐng)域具有重大意義。因此，建立快速、操作便利、靈敏的核酸檢測方法是非常必要的。核酸生物傳感器是將特定序列的探針分子偶聯(lián)在傳感芯片表面，通過與靶核酸雜交并將雜交信息以電信號、光信號等形式表達并檢測出來，是核酸研究的重要手段。表面等離子共振生物傳感器以其

2、不需要標記、簡單靈敏、特異性好、所需樣品量少、成本低廉、可在線監(jiān)測結(jié)合反應(yīng)的動態(tài)過程等顯著優(yōu)點而成為研究分子間相互作用的先進手段，并廣泛的應(yīng)用于生物分子的檢測領(lǐng)域。本研究以表面等離子共振生物傳感器為技術(shù)手段，整合分子生物學(xué)、分析化學(xué)和臨床檢驗診斷學(xué)技術(shù)，發(fā)展了簡單靈敏的核酸檢測方法。本研究主要包括以下兩個部分:
　　1.發(fā)展表面等離子共振核酸傳感器高靈敏的檢測沙門氏菌。
　　建立了一種基于表面等離子共振DNA生物傳感器的免標

3、記、高靈敏的沙門氏菌檢測方法。根據(jù)沙門氏菌特異性invA基因設(shè)計生物素修飾的單鏈寡核苷酸探針并固定在葡聚糖/親和素芯片表面。將invA基因從細菌菌體中提取出來并用不對稱PCR擴增。該傳感器檢測靶基因在濃度范圍為5nM-1000nM內(nèi)具有很好的線性關(guān)系，最低檢出限為0.5nM。該傳感器對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌沒有響應(yīng)，表明具有很高的特異性。整個雜交檢測過程僅需要15分鐘。芯片能夠重復(fù)使用300次以上。該方法靈敏特異，無需標記，可用于沙門

4、氏菌各血清型的檢測，具有很大應(yīng)用潛力。
　　2.構(gòu)建表面等離子共振生物傳感器用于miRNA的高靈敏檢測。
　　建立了基于表面等離子共振技術(shù)的miRNA的靈敏、特異的檢測方法。與目標miRNA互補的巰基標記的DNA探針吸附在芯片表面，特異性識別目標miRNA后，捕獲的目標miRNA再結(jié)合另一連接有親和素的識別探針。這種“三明治”的結(jié)合模式能夠顯著的增加響應(yīng)信號，并提高傳感器靈敏度約24倍。最低檢測限為1.7fM，同時能夠識別單