幾種抗癌活性成分對(duì)人正常肝細(xì)胞L02毒性的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、近年來(lái)，中藥及其制劑的毒性報(bào)道不斷增多。中藥引起的肝損傷為藥物性肝損傷的四大常見(jiàn)原因之一。
　　 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模悍謩e觀察中藥活性抗癌成分斑蝥酸鈉、沒(méi)食子酸、熊果酸對(duì)人正常肝細(xì)胞LO2的影響，為尋找有效的減毒增效拮抗劑提供線索。
　　 實(shí)驗(yàn)方法：采用MTT法檢測(cè)這三種抗癌活性成分對(duì)細(xì)胞的增殖抑制，倒置顯微鏡、熒光染色、電鏡檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，吉姆薩染色檢測(cè)細(xì)胞微核率，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，westernblot檢測(cè)各用藥組

2、細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)的變化。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：發(fā)現(xiàn)0.625μg/ml組、1.25μg/ml組、2.5μg/ml組斑蝥酸鈉作用24h，對(duì)LO2細(xì)胞的抑制率分別為為9.1％、17.1%、23.9%；對(duì)SMMC-7721的抑制率分別為11.2%、23.5%、30.7%。熒光顯微鏡下0.625μg/ml組無(wú)明顯改變，1.25、2.5μg/ml組LO2出現(xiàn)細(xì)胞染色體的斷裂；吉姆薩染色后在光鏡下計(jì)數(shù)0.625μg/ml組無(wú)明顯改變，1.25μg

3、/ml組微核率為46.0‰、2.5μg/ml組為52.2‰；0.625μg/ml組凋亡率為5.08%，1.25μg/ml為16.31%，2.5μg/ml組為21.86%，呈劑量依賴關(guān)系；電鏡證實(shí)2.5μg/ml組出現(xiàn)細(xì)胞皺縮、表面微絨毛減少，線粒體腫脹、脊斷裂，細(xì)胞內(nèi)空泡增多，細(xì)胞核固縮碎裂，呈凋亡特征性改變。1.25ug/ml和2.5ug/ml組Caspase-3、Bcl-2含量下降，Bax升高，與陰性對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.

4、05)，NFkb也有所升高，與陰性對(duì)照組相比無(wú)差異。熊果酸作用24h，12.5μmol/L組、25μmol/L、50μmol/L組對(duì)LO2細(xì)胞的抑制率分別為為5.4%，21.4%,49.8%，對(duì)SMMC-7721的抑制率分別為17.6%、36.1%、60.9%。熒光顯微鏡下50μmol/L組出現(xiàn)細(xì)胞核濃縮，亮度增高，形成彎月?tīng)?，偏向?xì)胞一側(cè)，甚至出現(xiàn)細(xì)胞碎片及凋亡小體。流式結(jié)果顯示細(xì)胞凋亡率為48.76%。沒(méi)食子酸作用24h，各劑量組均

5、對(duì)LO2和SMMC-7721細(xì)胞顯示出增殖抑制作用，但是到72h后，對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的增殖抑制作用超過(guò)了對(duì)LO2細(xì)胞的增殖抑制。沒(méi)食子酸作用24h后100μmol/L組細(xì)胞出現(xiàn)明顯的形態(tài)學(xué)改變，細(xì)胞凋亡，凋亡率為12.53%，Caspase-3和P53的表達(dá)升高.
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)論：斑蝥酸鈉、熊果酸和沒(méi)食子酸對(duì)肝癌細(xì)胞和正常肝細(xì)胞均有抑制作用。斑蝥酸鈉對(duì)正常肝細(xì)胞的抑制低于對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制；在中劑量時(shí)可引起正常肝細(xì)胞增殖抑

6、制、細(xì)胞染色體的損傷和細(xì)胞的凋亡；斑蝥酸鈉引起的細(xì)胞凋亡，可能與Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的改變有關(guān)。熊果酸對(duì)正常肝細(xì)胞的抑制低于對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制；熊果酸在25μmol/L時(shí)即可引起正常肝細(xì)胞增殖抑制,50μmol/L時(shí)不僅抑制肝細(xì)胞的增殖，還可以引細(xì)胞的凋亡；熊果酸引起的細(xì)胞凋亡，與Caspase-3蛋白的表達(dá)的改變有關(guān)。沒(méi)食子酸給藥給藥72h后對(duì)對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制才超過(guò)正常肝細(xì)胞的抑制；沒(méi)食子酸100μmol/L時(shí)