Junctophilin-2對(duì)小鼠心肌細(xì)胞Ca2+激活K+電流的影響.pdf

1、摘要IJunctophilinJunctophilin2對(duì)小鼠心肌細(xì)胞對(duì)小鼠心肌細(xì)胞CaCa22激活激活K電流的影電流的影響碩士研究生：楊陽導(dǎo)師：章茜教授專業(yè)：生理學(xué)鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理教研室河南鄭州450001摘要摘要1研究背景與目的:小電導(dǎo)Ca2激活K通道(smallconductancecalciumactivatedpotassiumchannelsSK，Kca2)可以表達(dá)在幾乎所有的可興奮細(xì)胞的細(xì)胞膜上。SK2通道是哺乳類動(dòng)

2、物心臟中表達(dá)的一種重要的離子通道，在心肌細(xì)胞動(dòng)作電位復(fù)極化中起著關(guān)鍵作用，尤其是在復(fù)極晚期。已有的研究表明，SK2通道的激活是通過細(xì)胞內(nèi)的鈣離子連接鈣調(diào)蛋白，通過誘導(dǎo)通道的構(gòu)象改變從而引起通道開放。細(xì)胞外的鈣離子是通過細(xì)胞膜上的鈣離子通道得以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)從而調(diào)節(jié)SK2通道的開放，然而細(xì)胞內(nèi)肌漿網(wǎng)膜上的蘭尼堿受體（ryanodinerecepts，RyRs）敏感的鈣釋放也會(huì)影響到SK2通道的功能。細(xì)胞膜表面與肌漿網(wǎng)（sarcoplasmic

3、reticulum，SRER）離子通道之間的功能交通是可興奮細(xì)胞的一個(gè)重要特征，而位于兩者之間的耦聯(lián)膜復(fù)合體（junctionalmembranecomplexes，JMCs）是實(shí)現(xiàn)其交通的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。Junctophilin（JP，JPH）是參與形成耦聯(lián)膜復(fù)合體的一個(gè)蛋白分子，其主要功能是在耦聯(lián)膜復(fù)合體中使細(xì)胞膜和肌質(zhì)網(wǎng)之間維持一個(gè)相對(duì)固定的距離，從而為細(xì)胞膜與肌漿網(wǎng)之間的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)提供了結(jié)構(gòu)基質(zhì)。在哺乳動(dòng)物的基因組中，JPH的4個(gè)組織特

4、異性基因亞型分別為JPH1JPH2JPH3JPH4，JPH2是作為一種調(diào)節(jié)心肌細(xì)摘要III3結(jié)果：1)PCR和陽性克隆測(cè)序證實(shí)了重組JPH2腺病毒表達(dá)載體已經(jīng)構(gòu)建成功；2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)表明MOI值為100時(shí)，ADNT組、pADJPH2siRNA感染組對(duì)原代培養(yǎng)小鼠心肌細(xì)胞的感染效率分別為76.9%、75.4%；3)Westernblot技術(shù)檢測(cè)蛋白表達(dá)量，表明轉(zhuǎn)染了ADJPH2siRNA重組腺病毒的新生小鼠心肌細(xì)胞JPH2及SK2蛋白

5、的表達(dá)明顯抑制；4)全細(xì)胞膜片鉗記錄各組細(xì)胞的IkCa，與正常對(duì)照組和ADNTsiRNA組相比較，ADJPH2siRNA重組腺病毒感染的新生小鼠心肌細(xì)胞中，所測(cè)得的SK2通道介導(dǎo)的K電流明顯降低。4小結(jié)：本實(shí)驗(yàn)將已構(gòu)建成功的針對(duì)JPH2基因的siRNA重組腺病毒載體轉(zhuǎn)染新生小鼠心肌細(xì)胞，通過干擾JPH2基因的表達(dá)可顯著抑制SK2蛋白的表達(dá)并降低心肌細(xì)胞Ca2激活K電流。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：Junctophilin；SK通道；RNA干擾；心肌