Junctophilin-2對小鼠心肌細胞Ca2+激活K+電流的影響.pdf

1、摘要IJunctophilinJunctophilin2對小鼠心肌細胞對小鼠心肌細胞CaCa22激活激活K電流的影電流的影響碩士研究生：楊陽導師：章茜教授專業(yè)：生理學鄭州大學基礎醫(yī)學院生理教研室河南鄭州450001摘要摘要1研究背景與目的:小電導Ca2激活K通道(smallconductancecalciumactivatedpotassiumchannelsSK，Kca2)可以表達在幾乎所有的可興奮細胞的細胞膜上。SK2通道是哺乳類動

2、物心臟中表達的一種重要的離子通道，在心肌細胞動作電位復極化中起著關鍵作用，尤其是在復極晚期。已有的研究表明，SK2通道的激活是通過細胞內(nèi)的鈣離子連接鈣調(diào)蛋白，通過誘導通道的構象改變從而引起通道開放。細胞外的鈣離子是通過細胞膜上的鈣離子通道得以進入細胞內(nèi)從而調(diào)節(jié)SK2通道的開放，然而細胞內(nèi)肌漿網(wǎng)膜上的蘭尼堿受體（ryanodinerecepts，RyRs）敏感的鈣釋放也會影響到SK2通道的功能。細胞膜表面與肌漿網(wǎng)（sarcoplasmic

3、reticulum，SRER）離子通道之間的功能交通是可興奮細胞的一個重要特征，而位于兩者之間的耦聯(lián)膜復合體（junctionalmembranecomplexes，JMCs）是實現(xiàn)其交通的結構基礎。Junctophilin（JP，JPH）是參與形成耦聯(lián)膜復合體的一個蛋白分子，其主要功能是在耦聯(lián)膜復合體中使細胞膜和肌質(zhì)網(wǎng)之間維持一個相對固定的距離，從而為細胞膜與肌漿網(wǎng)之間的信號轉導提供了結構基質(zhì)。在哺乳動物的基因組中，JPH的4個組織特

4、異性基因亞型分別為JPH1JPH2JPH3JPH4，JPH2是作為一種調(diào)節(jié)心肌細摘要III3結果：1)PCR和陽性克隆測序證實了重組JPH2腺病毒表達載體已經(jīng)構建成功；2)流式細胞儀檢測表明MOI值為100時，ADNT組、pADJPH2siRNA感染組對原代培養(yǎng)小鼠心肌細胞的感染效率分別為76.9%、75.4%；3)Westernblot技術檢測蛋白表達量，表明轉染了ADJPH2siRNA重組腺病毒的新生小鼠心肌細胞JPH2及SK2蛋白

5、的表達明顯抑制；4)全細胞膜片鉗記錄各組細胞的IkCa，與正常對照組和ADNTsiRNA組相比較，ADJPH2siRNA重組腺病毒感染的新生小鼠心肌細胞中，所測得的SK2通道介導的K電流明顯降低。4小結：本實驗將已構建成功的針對JPH2基因的siRNA重組腺病毒載體轉染新生小鼠心肌細胞，通過干擾JPH2基因的表達可顯著抑制SK2蛋白的表達并降低心肌細胞Ca2激活K電流。關鍵詞：關鍵詞：Junctophilin；SK通道；RNA干擾；心肌