N-乙酰半胱氨酸對(duì)苯誘發(fā)小鼠再障的拮抗作用研究.pdf

1、第一部分 建立苯誘發(fā)小鼠再障模型的方法探討 目的：探討建立苯誘發(fā)小鼠再生障礙性貧血(再障)模型的方法。方法清潔級(jí)雄性CD1小鼠140只，10只為正常對(duì)照組，余小鼠隨機(jī)分成5組，每組26只，A組為玉米油對(duì)照組，每只皮下注射玉米油4ml/kg體重，一周三次，B組為造模組，按給苯劑量不同分為B1組(0.5ml/kg)、B2組(1.0ml/kg)、B3組(1.5ml/kg)、B4組(2.0ml/kg)，各組均以玉米油補(bǔ)足至4ml

2、/kg體重，注射方法同對(duì)照組；分別于注射10、15、20、25次后，稱(chēng)重動(dòng)物，取眶血計(jì)數(shù)白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板和網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值及外周血白細(xì)胞分類(lèi)；處死小鼠，取一側(cè)股骨，制備骨髓單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后行CFU-GM測(cè)定；取另一側(cè)股骨做骨髓涂片檢查；取一根脛骨、肝和脾，做病理形態(tài)學(xué)觀察。 結(jié)果：(1)A組注射玉米油后的各項(xiàng)指標(biāo)與正常組對(duì)比無(wú)顯著差異(2)與A組相比，B組小鼠有多項(xiàng)指標(biāo)呈不同程度下降趨勢(shì)，其中B4組小鼠在給苯2

3、5次后全部指標(biāo)均下降，與A組比有顯著性差異，體重和脾臟指數(shù)分別比A組下降18.51％、63.86％(p＜0.01)，白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板、網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值和骨髓有核細(xì)胞數(shù)分別下降74.97％(P＜0.01)、41.66％(P＜0.01)、30.96％(P＜0.01)、24.77％(P＜0.05)、41.47％(P＜0.05)和61.61％(P＜0.01)，其中以白細(xì)胞下降最早且最明顯；CFU-GM計(jì)數(shù)減少32.28％(P＜0

4、.01)；骨髓涂片檢查和病理形態(tài)學(xué)觀察均顯示造血細(xì)胞減少，脂肪細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等非造血細(xì)胞增加。 結(jié)論： 1.通過(guò)予CD1小鼠皮下注射2ml/kg體重的苯，每周三次，累計(jì)給苯25次，可成功建立苯誘發(fā)小鼠再生障礙性貧血模型。 2.外周血白細(xì)胞下降最早且最明顯，可作為早期監(jiān)測(cè)苯的血液學(xué)毒性的理想指標(biāo)。 第二部分 N-乙酰半胱氨酸對(duì)苯誘發(fā)小鼠再障的拮抗作用初探 目的：驗(yàn)證苯誘發(fā)小鼠再生障礙性貧血模

5、型的可重復(fù)性，初步探討NAC對(duì)苯誘發(fā)小鼠再生障礙性貧血的拮抗作用及其機(jī)制。 方法：CD1小鼠60只，隨機(jī)分成4組，A組10只，為玉米油對(duì)照組，單純皮下注射玉米油4ml/kg，每周三次，共25次；B組10只，為NAC對(duì)照組，口服NAC400mg/kg/d；C組20只，為再障組，按第一部分B4組的方法復(fù)制再障動(dòng)物模型；D組20只，為NAC干預(yù)組，在C組的基礎(chǔ)上，口服NAC400mg/kg/d。按本研究第一部分的方法分別處理各組小鼠并

6、檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。另取部分肝臟，分別測(cè)定活性氧、丙二醛(MDA)、過(guò)氧化氫(H2O2)、總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、還原型谷胱甘肽(GSH)和巰基(-SH)的活性或水平。 結(jié)果：(1)A組與B組相比較，各項(xiàng)再障模型相關(guān)指標(biāo)無(wú)顯著差異。(2)C組小鼠各造模指標(biāo)全部下降，與A組比有顯著性差異，提示再障模型復(fù)制成功；(3)D組與C組相比，除血小板計(jì)數(shù)無(wú)顯著性差異外，其他各項(xiàng)造模指標(biāo)均有明顯改

7、善，WBC(p＜0.05)，RBC(p＜0.01)，HB(p＜0.05)，RET(p＜0.05)，提示NAC對(duì)苯的血液學(xué)毒性有一定的預(yù)防作用；(4)與A組相比，C組D組各氧化指標(biāo)均顯著增高，其中C組與A組相比活性氧(p＜0.01)、MDA(p＜0.01)、T-AOC(p＜0.05)、SOD(p＜0.01)、CAT(p＜0.01)，GSH含量無(wú)明顯變化，-SH下降(p＜0.01)；D組與A組相比活性氧(p＜0.05)、MDA(p＜0.01

8、)、T-AOC(p＜0.05)、SOD(p＜0.01)、CAT(p＜0.01)，GSH含量升高(p＜0.01)，-SH含量無(wú)顯著變化。(5)D組與C組相比各氧化指標(biāo)均顯著降低，活性氧(p＜0.01)、MDA(p＜0.01)、T-AOC(p＜0.05)、SOD(p＜0.01)、CAT(p＜0.01). 結(jié)論： 1.本實(shí)驗(yàn)建立苯誘發(fā)小鼠再障模型的方法可重復(fù)性好，有一定的實(shí)用價(jià)值。 2.苯誘發(fā)再障的機(jī)制中有氧化損傷作用