N-乙酰半胱氨酸對ARDS肺纖維化的抑制.pdf

1、急性呼吸窘迫綜合征(Acuterespiratorydistresssyndrome，ARDS)是急性肺損傷(Acutelunginjury，ALI)最嚴(yán)重的階段，是在肺內(nèi)外一系列嚴(yán)重疾病影響下，發(fā)生的以肺泡毛細(xì)血管損傷為主要表現(xiàn)的臨床綜合征。ARDS是一個(gè)動(dòng)態(tài)的疾病，可迅速進(jìn)展至具有不同臨床病理生理特征、不同治療需要的幾個(gè)階段。ARDS晚期間質(zhì)纖維增殖異常，若未被抑制，將進(jìn)展為纖維變性的肺損傷，間質(zhì)細(xì)胞及其產(chǎn)物沿著新生血管的管壁充滿肺

2、泡腔。組織學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，伴隨著成纖維細(xì)胞聚積，它們在空腔、間質(zhì)、呼吸性細(xì)支氣管和腺泡內(nèi)微血管壁產(chǎn)生大量結(jié)締組織產(chǎn)物，形成纖維化肺泡炎。纖維化肺泡炎與死亡率的增加相關(guān)，因此而死亡的患者尸檢發(fā)現(xiàn)肺部有膠原和纖維結(jié)合素的顯著累積。研究表明，纖維增殖異常是15％～40％的ARDS未存活患者的主要致死原因，而且還是其余未存活患者發(fā)生致命性膿毒血癥及相關(guān)多器官功能衰竭的促發(fā)因素，肺纖維化成為影響ARDS患者搶救成功率及預(yù)后的主要因素，因此，關(guān)于肺纖維

3、化形成機(jī)制及有效干預(yù)治療的研究非常重要。 目前，糖皮質(zhì)激素為治療ARDS肺纖維化的唯一手段。但是，由于糖皮質(zhì)激素可引起多種副作用，特別是其對機(jī)體炎癥和防御反應(yīng)的廣泛抑制，造成機(jī)體對多種病原體的易感性，可誘發(fā)或加重感染的發(fā)生。然而，ARDS患者常常存在嚴(yán)重感染，感染不僅是ARDS的誘因，而且是ARDS常見的并發(fā)癥。ARDS病程超過7天時(shí)，幾乎100％的患者合并感染。這就在很大程度上限制了糖皮質(zhì)激素在ARDS肺纖維化患者中的應(yīng)用。因

4、此，有必要尋求一種更為安全有效的防治ARDS肺纖維化的措施。 本課題從ARDS肺纖維化的發(fā)生機(jī)理出發(fā)，力圖在細(xì)胞水平探究抑制氧自由基損傷對ARDS肺纖維化的阻斷作用，以尋求新的防治ARDS肺纖維化的有效途徑。 目的從細(xì)胞水平研究脂多糖所致氧自由基損傷對肺纖維化形成的影響，觀察抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(NAC)對氧自由基損傷以及ARDS肺纖維化的影響，比較N-乙酰半胱氨酸與地塞米松(DEX)二者的作用有無差異。 研

5、究方法膠原含量是肺纖維化程度的重要指標(biāo)。肺內(nèi)膠原85％由肺成纖維細(xì)胞產(chǎn)生，因此本實(shí)驗(yàn)以體外培養(yǎng)的人胚肺成纖維細(xì)胞做為研究對象，將其分為四組，依次為：空白對照組；脂多糖處理組，用于模擬ARDS的細(xì)胞模型，觀察脂多糖對ARDS肺纖維化的影響；N-乙酰半胱氨酸加脂多糖處理組，觀察N-乙酰半胱氨酸對脂多糖所致肺纖維化的影響；地塞米松加脂多糖組，做為治療對照組，觀察地塞米松對脂多糖所致肺纖維化的影響，并比較N-乙酰半胱氨酸與地塞米松二者的作用有無

6、差異。 四組細(xì)胞體外培養(yǎng)約24小時(shí)后，提取細(xì)胞內(nèi)總蛋白，使用考馬斯亮蘭法測定細(xì)胞內(nèi)總蛋白含量，Sircol膠原測定試劑盒測定細(xì)胞內(nèi)膠原蛋白含量，根據(jù)細(xì)胞內(nèi)膠原蛋白含量在細(xì)胞內(nèi)總蛋白含量中比例的變化，比較幾種處理因素對肺纖維化的影響。 為進(jìn)一步明確幾種處理因素影響肺纖維化的機(jī)理，使用還原型谷胱甘肽測定(γ-glutamylcysteinylglycine，GSH)試劑盒測定細(xì)胞內(nèi)GSH含量的變化——GSH含量變化是細(xì)胞氧自

7、由基損傷程度的重要指標(biāo)。根據(jù)細(xì)胞內(nèi)GSH含量在細(xì)胞內(nèi)總蛋白含量中比例的變化，比較幾種處理因素對肺成纖維細(xì)胞氧自由基損傷的影響，從而明確氧自由基損傷在ARDS肺纖維化發(fā)病過程中所起的作用。 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，樣本均數(shù)的差異顯著性檢驗(yàn)使用方差分析，P＞0.05表示無顯著性差異，P＜0.05表示有顯著性差異。 結(jié)果1.與空白對照組相比，LPS可明顯誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞產(chǎn)生膠原(P=0.022)及細(xì)胞內(nèi)GSH含量減

8、少(P=0.011)。 2.NAC明顯抑制LPS所誘導(dǎo)的肺成纖維細(xì)胞膠原產(chǎn)生(P=0.012)以及細(xì)胞內(nèi)GSH含量減少(P=0.008)。 3.DEX明顯抑制LPS所誘導(dǎo)的肺成纖維細(xì)胞膠原產(chǎn)生(P=0.041)以及細(xì)胞內(nèi)GSH含量減少(P=0.028)。 4.NAC與DEX在抑制LPS所誘導(dǎo)的肺成纖維細(xì)胞膠原產(chǎn)生(P=0.563)以及細(xì)胞內(nèi)GSH含量減少(P=0.540)方面的作用無顯著差異。 結(jié)論1.脂